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討論串[問題] 請問ligation的一些問題
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#4
Re: [問題] 請問ligation的一些問題
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者aljkpyy (hihi)時間19年前 (2007/04/05 00:26), 編輯資訊
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一顆都沒長 會不會是抗生素加的量過多. 導致全部殺光光. plasmid的抗藥性也是有極限的. --. ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc). ◆ From: 218.175.60.69.
#3
Re: [問題] 請問ligation的一些問題
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者tyhong (prion)時間19年前 (2007/04/04 13:31), 編輯資訊
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切一刀 作cip 再ligation與切兩刀ligation成功率來講是不一樣. 基本上分子碰撞都是機率 但沒什麼理由接不太起來. 切一刀 載體puc18 2.7kb 我接過12kb與13kb的insert. 切兩刀的接過3.8kb insert. 沒有那種insert太大接不起來的的學理根據. 有
#2
Re: [問題] 請問ligation的一些問題
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者jujuboy (啾啾男孩)時間19年前 (2007/04/04 13:16), 編輯資訊
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你的insert太大了 理論上本來就不可能接的起來. 一般來說 只要超過vector大小1/3的insert都太大 但也許有高手覺得沒差(汗). 在ligation過程中insert跟vector很難去碰撞到並且起反應. 我的實驗室中 有人做過最大的construct是3k insert接5k ve
#1
[問題] 請問ligation的一些問題
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者icosm (...)時間19年前 (2007/04/04 11:52), 編輯資訊
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就是我最近在做一個ligation. size分別為insert 3.4 kb vector 3.3kb. 我用限制脢將vector切開後 再用CIP處理一小時. 然後就進行ligation 以濃度比insert:vector=3:1來做. ligation的條件為16度 o/n. 然後以heat-
(還有77個字)
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