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討論串[問題] western blotting!! 常抽到DNA!!造成拖 …
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#4
Re: [問題] western blotting!! 常抽到DNA!!造成拖 …
推噓1(1推 0噓 0→)留言1則，0人參與, 最新作者cytospin (My Ernest)時間19年前 (2007/04/16 11:25), 編輯資訊
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※ 引述《phyton.bbs@ptt3.cc (要追我請先告白)》之銘言：. 想順便請教一下.... 我有兩個細胞要染一樣的抗體. 其中有一個就很容易就做出來了. 可是另外一個卻怎麼座都做不出來 我要做的是RTK 還有Akt. 請問一下 sonicate是否為重要步驟. 我的磷酸化蛋白測試結果很不
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#3
Re: [問題] western blotting!! 常抽到DNA!!造成拖 …
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者EROICAA (遠道者)時間19年前 (2007/04/16 03:48), 編輯資訊
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有sonication 就不用再去擔心有沒有打破核膜的問題. 還有要看的如果是膜蛋白，應該有比RIPA 更好的配方. RIPA其實是最適合看細胞質內soluble protein的. 如果你很確定拖帶的現象是DNA造成的. 那sonication 就是關鍵. 我看過很多sonication 的pro
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#2
Re: [問題] western blotting!! 常抽到DNA!!造成拖 …
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者phyton.時間19年前 (2007/04/15 05:55), 編輯資訊
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有個方法，雖然從沒耐心到試成功過 orz. DNA太多太黏的時候可以拿個針筒重複過細小的針頭. 把DNA攪斷，這樣應該會好些. 把核膜溶掉一定會跑出一大堆DNA的. 沒辦法(攤手). ※ 引述《aggaci.bbs@ptt.cc (reject！又reject！)》之銘言：. --. ※ 發信站:
#1
Re: [問題] western blotting!! 常抽到DNA!!造成拖 …
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者aggaci (reject！又reject！)時間19年前 (2007/04/14 23:16), 編輯資訊
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你這個方法是看total cell protein吧？而你說想看細胞膜的蛋白？. 你應該去買專門抽膜蛋白的kit PIERCE有. 也許會貴點，但是你連PAGE都用現成的，我想這KIT對妳們應該不會太貴！. 另外，你說會拖？你是不是overloading了？. 因為你都sonication了，DNA
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