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[ Biotech ]
討論串[求救] transformation的問題
共 8 篇文章
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vector: pETBlue己接上要表現的gene，約4.5Kb. insertt: 做純化用的，his tag，約24bp. control沒做...會記得要做. ligation:. vector:insert=1:3. T4 ligase:16℃、16h (fermentas). total
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電穿孔要使用cuvet..用完還要洗..個人覺得很麻煩. 而且competent cell製作比較麻煩(以時間觀點來看啦..外加我很懶..XD). 基本上如果你要transform的大小不太大的話. 能用heat-shock就用heat-shock. 你應該在每次做的時候都加入一組control.
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目前transform一直長不出來. 在做完double digestion後. 做ligation，插入一段insert. transform 到competent cell裡. 目前能確認的是︰. 有做single digestion，確定enzyme都能切. insert的切位是設計好的. t
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