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討論串[求救] 2D真難搞
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#4
Re: [求救] 2D真難搞
推噓1(1推 0噓 0→)留言1則，0人參與, 最新作者muchmoa (...)時間18年前 (2008/05/03 10:57), 編輯資訊
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如Proteomics說的，你的蛋白質溶液還有很多雜質，. 離細胞用的低轉速很難把supernatant完全吸除，. 一不小心就會吸到細胞，而殘留的supernatant都是會干擾IEF的，. 所以還要做沈澱才行，或是其他純化的方法，. 用kit或filtration都可以讓鹽類等雜質變少，. 另外
#3
Re: [求救] 2D真難搞
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者sharkcell (壓力漸漸變大)時間18年前 (2008/04/28 01:39), 編輯資訊
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我來說說我之前碩士做2D sample preparation的過程：. 1.400uL蛋白質粗抽液+100uL 50%TCA in Acetone. (由於我的sample是葉片，為了去色素使用Acetone). 2.votex均勻後置於-20度1小時以上. 3.4度下12000rpm 離心10
(還有432個字)
#2
Re: [求救] 2D真難搞
推噓2(2推 0噓 2→)留言4則，0人參與, 最新作者kakaman (日子過的真快阿)時間18年前 (2008/04/27 15:04), 編輯資訊
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sample的處理是把細胞離下來後. 用lysis buffer(CHAPS+Urea)+PMSF去破細胞. 放在冷房摩天輪轉一個小時. 接著13000rpm 20min. 吸上清液 定量後上IEF. --. ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc). ◆ From: 163.25.118.177
#1
[求救] 2D真難搞
推噓4(4推 0噓 2→)留言6則，0人參與, 最新作者kakaman (日子過的真快阿)時間18年前 (2008/04/27 00:19), 編輯資訊
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做了好幾遍. 出現的狀況都一樣. 就是點很少 超極少... 少到不敢拿給老師看.... 查了2D的trouble shooting. 發現原因可能有幾個:. 1.定量錯誤 這點已經排除了 拿去跑western染銀染染的出來. 2.buffer:這點應該也排除了 有跟其他實驗室拿他們的buffer來跑
(還有34個字)
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