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討論串[求救] western blot 全黑
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#4
Re: [求救] western blot 全黑
推噓1(1推 0噓 6→)留言7則，0人參與, 最新作者linwei (我會好好加油^^)時間16年前 (2009/06/30 21:02), 編輯資訊
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哈 我再說清楚一點齁@@. 步驟是. 1. transfer 完的 membrane 用 5% 牛奶blocking 1.5 h. 2. 倒掉牛奶 加入 1抗 (用blocking 溶液 1:1000稀釋泡成的). 3. 4度C overnight後 又 37度C 1hr. 4. wash 30mi
(還有14個字)
#3
Re: [求救] western blot 全黑
推噓2(2推 0噓 4→)留言6則，0人參與, 最新作者linwei (我會好好加油^^)時間16年前 (2009/06/30 18:33), 編輯資訊
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謝謝大家的建議. 我稀釋的比例是 1:1000. 然後是用5%的牛奶泡成的抗體(同時也是我們的blocking溶液). 抗體是新泡的 (因為我是跟我同學要原液回來泡的喔). 然後只做一次(就是全亮的這一次@@"). 我想我會再稀釋我的一抗的濃度. 譬如說我原本泡的有10c.c. 我想我會先取2c.c
#2
Re: [求救] western blot 全黑
推噓0(0推 0噓 1→)留言1則，0人參與, 最新作者SPK (雲淡風輕)時間16年前 (2009/06/30 16:50), 編輯資訊
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片子都已經全黑了要嘛過度曝光，要嘛就是substrate太多，你自己去看的結果也是整. 片亮那就是substrate太多了啦，你加點水稀釋一下。. 如果是抗體有問題，問題也不會出現在二抗，而是一抗亂黏的機會比較大，看是不是. reuse太多次了，當然monoclone的ab是比較純比較好但也比較貴，
(還有199個字)
#1
[求救] western blot 全黑
推噓4(4推 0噓 2→)留言6則，0人參與, 最新作者linwei (我會好好加油^^)時間16年前 (2009/06/29 20:32), 編輯資訊
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請益各位. 因為我第一次遇到這種情況@@. 我壓的protein 是 cleaved caspase 3. 使用的抗體是 cell signaling 編號9661 的抗體. 今天我做實驗. 壓出來一整片都是黑的. 結果關燈發現整片menbrane都發亮. 我很確定我二抗沒有給錯啦@@ 且也有很努力
(還有59個字)
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