[實驗] 電泳膠體的製備

看板PhD (博士班)作者euphonium15 (心動夢幻)時間15年前 (2011/03/25 01:31)推噓4(4推 0噓 5→)

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※ [本文轉錄自 Chemistry 看板 #1DYt3U7g ] 作者: euphonium15 (心動夢幻) 看板: Chemistry 標題: [實驗] 電泳膠體的製備時間: Fri Mar 25 00:27:08 2011 原PO的領域不是做電泳相關研究~ 電泳實驗也從來沒有碰過~更不用說要製備膠體Orz 如今碰到了一點問題~想來詢問有經驗的板友~ 詳情如下: 原PO前幾天接獲老板指示要根據一篇文獻製作Diffusive Gels出來~ 看了一下所需要的藥品~ 1. Acrylamide 2. Agarose cross-linker 3. Ammonium persulfate 4. TEMED 上網查了一些資料~發現似乎跟跑電泳用的膠體類似~ 根據文獻~原PO使用了下面的步驟: 1. 25mL 15% Acrylamide+7.5mL 0.3% Agarose+ 17.5mL DI Water當stock solution. 2. 取10mL stock solution加入70uL Ammonium persulfate以及20uL TEMED充分混合. 3. 裝入holder後,迅速放入約40度左右的烘箱約60分鐘. 理論上出來的應該是跟果凍一樣的膠體才對~不過原PO做出來的應該只能說是膠水Orz 不知道是哪裡出了問題~理論上應該跟文獻有一樣的結果才對~ 自己的猜測: 1. 因為使用的藥品跟文獻的廠牌不一樣,導致成膠的能力也會略有差異? 如果是這樣的話,是否加入多一點Ammonium persulfate或是TEMED可以改善呢? 2. 因為文獻製作出來的Diffusive Gels厚度只有0.4mm之間. 原PO只是先行測試成膠的能力,因此只是大概找個holder讓它成形而已. 厚度大概有1-2mm左右,不知道厚度會不會影響到成膠的能力? 3. 此外文獻為了讓gel成形,使用了兩片玻璃將其夾住後再放入烘箱. 原因同2.一樣,原PO只是先行測試成膠的能力好壞,並沒有這樣處理. 不知道這會不會也是關鍵的因素之一呢? 希望有經驗的板友可以給點意見~總比一個人在那瞎子摸象好XD -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 114.37.164.133 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 114.37.164.133

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puec2

03/25 01:33, , 1^F

03/25 01:33, 1^F

相關文獻上主要是用Agarose來使用. 當然也有人使用Bis-acrylamide. 我所參考的文獻是使用Agarose.

推

YuChHa

03/25 01:53, , 2^F

03/25 01:53, 2^F

不瞞您說,這技術全名是Diffusive Gradients in Thin-films. 老實說也已經有商業化產品出來,自己手上就有幾個@@" 拆開來看過,裡面的gel是有點像隱形眼鏡那樣,可以夾起來.