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討論串[問題] 請問有關western blot抗體使用
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#4
Re: [問題] 請問有關western blot抗體使用
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者boblu.時間19年前 (2006/06/12 02:01), 編輯資訊
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一般來說脫脂牛奶不建議長時間重複使用. （也不是一定不行 就是不建議）. 要重複使用的可以用 BSA + NGS. 另外，HRP 的確不能碰 Sodium Azide. 不過正常的 western 步驟應該都可以有效去除掉 1st Ab 中的 azide. 小袋封裝可以作到 1-2 mL 吧 ^^?
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#3
Re: [問題] 請問有關western blot抗體使用
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者glutamate (cch)時間19年前 (2006/06/09 18:25), 編輯資訊
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我們實驗室都是用養菌的Agar plate. 上面先放幾百microliter的抗體溶液(依照membrane面積大小而異). 然後將membrane直立在吸水紙上方瀝乾殘留液體. 將transfer蛋白質那一面membrane朝下泡在含有抗體的Agar plate中. 使用此法須注意. 1.Aga
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#2
Re: [問題] 請問有關western blot抗體使用
推噓1(1推 0噓 1→)留言2則，0人參與, 最新作者hurp (LentiVirus)時間19年前 (2006/06/09 04:48), 編輯資訊
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以Santa Cruz p53 DO-1 antibody為例, 我將ab 1:3000 泡在 1X TBST. with 0.05% Sodium Azide, 可加 4%奶粉. 存放及使用都是在4度C. 這一管東西,. 我平均一個禮拜用一次以上, 回收再用. 再沒有補加ab的情況下,. 目前已經
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#1
[問題] 請問有關western blot抗體使用
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者ginmol (儲備博士)時間19年前 (2006/06/09 00:03), 編輯資訊
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我有幾個有關western blot的問題想請教各位先進：. 1. 一級抗體的稀釋溶液何種較佳？可使其能夠保存重複使用？. 2. 是否曾嘗試以微量反應體積覆蓋membrane的方式進行抗體抗原反應？. 3. 一般蛋白loading量約多少較為適當？. 4. AP與HRP系統，何者的訊號強度較高？.
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