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討論串請問用enterokinase切fusion protein的問題

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請問用enterokinase切fusion protein的問題

推噓0(0推 )留言0則，0人參與作者dorphilvet ( )時間19年前 (2006/03/13 22:46)資訊

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之前純化的蛋白是用pET32a的質體所純化. 因為要用此蛋白做單株抗體. 免疫老鼠二次後，昨天抽血測抗體力價. 分別用ELISA和WESTERN coating 純化的蛋白和pET32a only. 但是都會辯認. 且pET的抗原性又很強. 所以也許老鼠只認我純化的蛋白上的fusion protei

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Re: 請問用enterokinase切fusion protein的問題

推噓0(0推 )留言0則，0人參與作者aggaci (好想學鋼琴阿!(學陶笛中))時間19年前 (2006/03/13 22:58)資訊

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enterokinase非常難用. 你確定要用嗎?. --. http://0rz.net/da0PG 我的相簿..... --. ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc). ◆ From: 140.114.100.165.

Re: 請問用enterokinase切fusion protein的問題

推噓0(0推 )留言0則，0人參與作者dorphilvet ( )時間19年前 (2006/03/13 23:09)資訊

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※ 引述《aggaci (好想學鋼琴阿!(學陶笛中))》之銘言：. 就是很不想用，所以才問有沒有其他的方法…. 難道只有enterokinase可以切pet的fusion protein嗎?. 大家有其他的方法嗎?. 感謝回答^^. --. ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc). ◆ From

Re: 請問用enterokinase切fusion protein的問題

推噓0(0推 )留言0則，0人參與作者ROKEE (可不可以不要再胖下去啦~)時間19年前 (2006/03/13 23:18)資訊

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enterokinase超貴，而且很難操作. 當初構clone的時候沒有考慮到這個問題嗎?. 小弟直覺只有用enterokinase切了. 不然就重新構clone然後重收蛋白吧. pET32的空載體就會自動放一個16 kD大小的蛋白了. 前面有s-tag和兩邊的Hisx6幫助純化外. 另外就是有th

(還有55個字)

Re: 請問用enterokinase切fusion protein的問題

推噓0(0推 )留言0則，0人參與作者aggaci (好想學鋼琴阿!(學陶笛中))時間19年前 (2006/03/13 23:58)資訊

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pET32a應該是fusion thioreduxin(是這樣拼嗎，忘了). 若你是想增加suluble的蛋白質. 試試GST、MBP比較好，且純化方便. 我們實驗室都有切成功的案例. 至於32a沒成功過. 我覺的重新接到GST或是MBP比較好. --. http://0rz.net/da0PG 我

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