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討論串[求救] cloning求救...一直做到怪東西阿
共 6 篇文章
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看你最後抽出來的應該是雜菌沒有錯. 我想真的如之前版友說的你兩個切位太近了. 而且vector跟insert比例真的是過高. 除了要看你兩個enzyme的效率是不是不同. (有時也有可能是ENZYME失效). 有時候切動一刀也是接不進去的. 還有你vector有做CIP嗎? insert千萬不要CI
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請問你純化出來dna的體積是多少，你又load了多少體積的DNA?. 1:5的比例我覺得是錯的，因為從你的圖看起來，insert跟vector的亮度差不多，但是. 要記得，越大的fragment抓到的EtBr會越多，所以雖然看起來亮度差不多，dna的量其實. 差很多。你應該要將亮度的比例除以分子量的
(還有471個字)
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你之後所挑的那一些colonies.....我覺得...應該是雜菌........ 如果你有查過這一些資訊....那我相信你vector切完之後一定會做CIP...... 既然有做CIP....就不太容易再挑到pET的菌...... 有時, 作sub-cloning也是運氣運氣....... 我運氣
(還有19個字)
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我特別去查了一下pET32a plasmid map...... 我發現到一件事.....你可能要換restriction enzyme才能做出來...... 原因如下...... 在pET32a map上...Hind III的位置在第173bp而Sal I的位置在第179bp. map上的序列如
(還有978個字)