Re: [求救] cloning求救...一直做到怪東西阿
※ 引述《ssuny (Cheer up!!!)》之銘言：
: 感謝您的回文..
: 關於您說的我之前也有查過相關資訊
: 我也想說有可能只有一邊被切開 不過還是硬著頭皮做下去
: 酵素我是分兩次切的 所以就算是沒接成功應該也只是挑到吃到pET的colony
: 可是今天挑出來的colony完全不是這回事
: 我挑到的colony切下來根本就不是pET...Orz
: 這情形我從來沒遇過
: 您的建議我會仔細考慮的...也許換個切位是最好的方式
: 多謝啦!
看你最後抽出來的應該是雜菌沒有錯
我想真的如之前版友說的你兩個切位太近了
而且vector跟insert比例真的是過高
除了要看你兩個enzyme的效率是不是不同
(有時也有可能是ENZYME失效)
有時候切動一刀也是接不進去的
還有你vector有做CIP嗎? insert千萬不要CIP喔
不然也是絕對接不進去的
除了這些還有你抗生素是不是有選對 還有抗生素的濃度
ligase的效率 甚至是你的勝任細胞是不是沒有功用了
很多因素都要考慮
其實我覺得construction的確是要很多經驗的累積
不過千萬別因為這樣就換題目啊...這是小事而已啊
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