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[求救] 免疫螢光染色問題

看板Biotech (生命科學)作者 (山邱)時間4天前 (2025/02/04 10:47), 編輯推噓1(1推 0噓 9→)
留言10則, 3人參與, 2天前最新討論串1/1
年前做了mitotracker（cell signal #9082)去染細胞的粒線體。 做完大概隔一個禮拜上confocal，結果不管是什麼處理看紅色螢光時背景都會一點一點的 ，不確定是什麼原因。 https://i.imgur.com/pjRja3s.jpeg
細胞養在 chamber slide 步驟： 1. 依照條件在收細胞前45 min加入mitotracker 2. Wash 3次 3. -20度 methanol 固定15min 3. Wash 3次 5 min 4. 加入0.2% Triton 15min 5. Wash*3 6. 3% BSA block 1hr 7. Wash*3 8. DAPI 10min 9. Wash*3 10.拔chamber 封片 11. 避光存放在4度 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 223.136.129.241 (臺灣) ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1738637225.A.D5B.html
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02/04 12:37, 4天前 , 1F
Mitotracker 很難長時間儲存，染完最慢隔天就要處理了，放
02/04 12:37, 1F
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02/04 12:37, 4天前 , 2F
越久越容易有問題
02/04 12:37, 2F
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02/04 16:10, 4天前 , 3F
好的 我再弄新的試試，感謝提點
02/04 16:10, 3F
推
02/06 12:05, 2天前 , 4F
你有要染其他抗體嗎？ 沒有的話 PFA後面可以全部省略
02/06 12:05, 4F
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02/06 12:05, 2天前 , 5F
掉
02/06 12:05, 5F
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02/06 12:06, 2天前 , 6F
同 B大 這種mito tracker 或 LysoTracker都是尤其細
02/06 12:06, 6F
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02/06 12:06, 2天前 , 7F
胞活著時的電位差或 pH值才會發光 所以 fix後效果都
02/06 12:06, 7F
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02/06 12:06, 2天前 , 8F
會相對不好 (或沒訊號)
02/06 12:06, 8F
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02/06 12:08, 2天前 , 9F
然後 dye可以全速離一分鐘拿上清去染 避免一些保存久
02/06 12:08, 9F
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02/06 12:08, 2天前 , 10F
導致的沉澱
02/06 12:08, 10F
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