討論串[求救] colony PCR有P到 但定序無結果
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推噓0(0推 0噓 0→)留言0則,0人參與, 最新作者EROICAA (遠道者)時間19年前 (2007/04/06 06:42), 編輯資訊
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隨便放一點點(記得,真的要"一點點"!)transformation 用的. competent cell solution 在沒有抗生素的agar plate 上就能得到一堆. 這個描述聽起來就是colony 同時有兩種plasmid 的情況. (在假設那個1 kb 是正確product 而非no
(還有326個字)

推噓0(0推 0噓 0→)留言0則,0人參與, 最新作者EROICAA (遠道者)時間19年前 (2007/04/06 06:13), 編輯資訊
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colony PCR check 有結果,最後amplify出來的plasmid不對. 最常見的原因就是部份或不完整的的ligation product. 混在最後的transformation solution 中一起被塗在agar plate上. 然後被敏感度很高的PCR 偵測到. 但其實不是你
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推噓1(1推 0噓 2→)留言3則,0人參與, 最新作者pan7353 (要變成自己喜歡的模樣)時間19年前 (2007/04/05 21:03), 編輯資訊
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1. 你挑的是藍的還是白的?.. 白的. 2. 你的insert 的來源是那裡?.. 放在 yT&A vector 中的某個基因 我要在他兩端加上切位 所以抽plamid 做模板去p. 3. 放個沒有transform 的 E.coli 再 PCR 一次看看. 順便做一個只放空vector (沒有菌
(還有1054個字)

推噓0(0推 0噓 0→)留言0則,0人參與, 最新作者janmei (展眉)時間19年前 (2007/04/05 18:47), 編輯資訊
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colony pcr 比較快可以知道結果. 但是電泳跑膠看到的band 必須要是很明顯粗粗的. 才代表這個菌比較有可能真的帶有你要的insert在裡面. 因為pcr放大效果很明顯. 所以有時會放大到未進入菌體的片段. 也就是你會看到有p出band來. 但實際上是沒挑到的. 每個實驗室習慣都不同. 有

推噓0(0推 0噓 0→)留言0則,0人參與, 最新作者MrCAKE (Keep Working)時間19年前 (2007/04/05 17:28), 編輯資訊
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這其實並沒有一定的道理. enzyme digestion比較準確. 但colony PCR也有他的好處在. 畢竟前者要先抽plasmid而且還必須要有合適的限制脢可用. 決定要用哪個方法前也可以稍微計算一下成本的問題. --. 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc). ◆ From: 140.
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