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討論串[求救] 誘導表現蛋白質
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#4
Re: [求救] 誘導表現蛋白質
推噓0(0推 0噓 1→)留言1則，0人參與, 最新作者Mouseking (叫我老鼠王....-_-)時間19年前 (2007/05/08 18:43), 編輯資訊
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我最近也在做這實驗....但很不順利. 請問你的protocol可以分享嗎？. 我也會定期和你討論我的結果...謝謝. --. ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc). ◆ From: 123.192.206.98.
#3
Re: [求救] 誘導表現蛋白質
推噓2(2推 0噓 4→)留言6則，0人參與, 最新作者Talen (找到答案了~)時間19年前 (2007/05/08 10:10), 編輯資訊
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謝謝你的回應～^^. supernatant 和 pellet 部分都有做. 我有用anti-his偵測我的目標蛋白是在 supernatant. 破菌後取固定菌數 loading 跑 SDS-PAGE 發現我的目標蛋白相對量減少很多. 目前我在懷疑我的蛋白會不會被 degrade. 是否可以加入類
#2
Re: [求救] 誘導表現蛋白質
推噓1(1推 0噓 0→)留言1則，0人參與, 最新作者u8524009 (VIP好人卡....)時間19年前 (2007/05/07 22:06), 編輯資訊
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要先問一下你所謂的破菌後蛋白質少很多..是你用那一個fraction去跑膠得到的結果. 不曉得你有沒有測過你的目標蛋白質是soluble form還是inclusion body?. 假設你的蛋白質是inclusion body,而你取上清液去跑膠;. 亦或是你的蛋白質是soluble form,而
#1
[求救] 誘導表現蛋白質
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者Talen (找到答案了~)時間19年前 (2007/05/07 19:15), 編輯資訊
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最近正在做表現蛋白質的實驗. 利用pET30a接入欲表現的蛋白質(約30 KD)後. 送入BL21(DE3)中 加入IPTG以誘導表現出蛋白. 目前誘導表現情形很順利 28度C 6小時. 在破菌前有取 200 ul 確認過有誘導出來. 但問題是每次在破菌後 我要表現的蛋白質會減少很多. 不知道是什麼
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