Re: [求救] 誘導表現蛋白質
※ 引述《Talen (找到答案了~)》之銘言：
: 最近正在做表現蛋白質的實驗
: 利用pET30a接入欲表現的蛋白質(約30 KD)後
: 送入BL21(DE3)中 加入IPTG以誘導表現出蛋白
: 目前誘導表現情形很順利 28度C 6小時
: 在破菌前有取 200 ul 確認過有誘導出來
: 但問題是每次在破菌後 我要表現的蛋白質會減少很多
: 不知道是什麼問題?
: 希望各位前輩能提供一些建議 感激不盡～
: 破菌的方法：
: Sonication 強度為３或４都用過 打十秒 停十秒 共１０分鐘
: French press 使用大 Cell
: 但都依樣結果
要先問一下你所謂的破菌後蛋白質少很多..是你用那一個fraction去跑膠得到的結果
不曉得你有沒有測過你的目標蛋白質是soluble form還是inclusion body?
假設你的蛋白質是inclusion body,而你取上清液去跑膠;
亦或是你的蛋白質是soluble form,而你取離心後不溶的pellete去跑膠
都會得你像你所說的破菌後,蛋白質減少很多的現象
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◆ From: 140.114.96.172
推
05/08 16:47, , 1F
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