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討論串[問題]GST fusion protein的問題
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Re: [問題]GST fusion protein的問題
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者ROKEE (可不可以不要再胖下去啦~)時間19年前 (2006/04/21 14:37), 編輯資訊
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你上面的狀況我最近也遇到了. 我的chimera protein (GST-XXX) 大約是 42 kD. (用BL21(DE3)當表現的host cell). 跑出來除了差不多size的地方有明顯的粗band外. 在28kD附近也有很粗大一條. 但，當我把相同的clone送到JM109以後這情形就
#2
Re: [問題]GST fusion protein的問題
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者dorphilvet ( )時間19年前 (2006/04/20 16:20), 編輯資訊
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如果ligation後，transfermation 到 jm109或其他保菌的e.coli. 你塗滿滿個plate後，隔天長出來的，一顆一顆的，你可以做colony PCR或養O/N. 隔天用酵素切，如果有的話. 那個顆菌還不能叫做是single colony. 你必需要把他確定有INSERT的C
(還有196個字)
#1
Re: [問題]GST fusion protein的問題
推噓8(8推 0噓 5→)留言13則，0人參與, 最新作者churchfire (別小看我...)時間19年前 (2006/04/13 15:22), 編輯資訊
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我在做GST-fusion protein的時候. 我一開始養小量的試IPTG&溫度&時間. 後來我在試時間的時候，IPGT濃度固定在0.4mM 溫度25度. 0、3、6、9小時都收，在跑PAGE的時候其實看不怎麼出來我的蛋白有沒有大量表現. 我的蛋白(26KD)加上GST(26KD)大約為52KD
(還有394個字)
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