Re: [問題]GST fusion protein的問題
※ 引述《churchfire (別小看我...)》之銘言：
: 我在做GST-fusion protein的時候
: 我一開始養小量的試IPTG&溫度&時間
: 後來我在試時間的時候，IPGT濃度固定在0.4mM 溫度25度
: 0、3、6、9小時都收，在跑PAGE的時候其實看不怎麼出來我的蛋白有沒有大量表現
: 我的蛋白(26KD)加上GST(26KD)大約為52KD
: 反觀GST在26KD的位置都有表現!
: 同樣的條件去做western
: 只有3hr的菌有看到微弱fusion protein的band 並有明顯的GST only的band
你上面的狀況我最近也遇到了
我的chimera protein (GST-XXX) 大約是 42 kD
(用BL21(DE3)當表現的host cell)
跑出來除了差不多size的地方有明顯的粗band外
在28kD附近也有很粗大一條
但，當我把相同的clone送到JM109以後這情形就消失了
這情況我同學也發生
我們倆覺得是不是因為那個被peptidase辨識的區域的a.a.鍊比較弱
所以容易斷掉....
(以上純為推測)
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