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討論串[問題] DNA elute後大小變了
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#4
Re: [問題] DNA elute後大小變了
推噓5(5推 0噓 0→)留言5則，0人參與, 最新作者Fourfish (～四條魚～)時間19年前 (2006/08/15 20:28), 編輯資訊
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我之前也有做後續的ligation 也沒成功.... 昨天跟我學長討論了一會. 發現可能是因為double digest的兩酵素切位太相似（查過 的確蠻相似的）. 且elute過程中的buffer變化. 使得DNA產生幾個bp的自接 形成circularly form. 為了自接 DNA產生些扭曲
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#3
Re: [問題] DNA elute後大小變了
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者MegaFire (怪走該)時間19年前 (2006/08/15 16:56), 編輯資訊
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我之前作也有這樣的狀況. 因為我作的是promoter的部分，所以學長認為可能形成一些2ndary structure. 我把elution product拿去加熱到65度10分鐘後放回冰上. size的確有恢復. 但是冰到-20下次用的時候又變小了.... 而且，ligation還是不成功. 所以
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#2
Re: [問題] DNA elute後大小變了
推噓1(1推 0噓 1→)留言2則，0人參與, 最新作者wea (gh)時間19年前 (2006/08/15 11:44), 編輯資訊
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如果不是操作過程中 弄錯了什麼. 應該沒關係的. 1.你可以將elute出來的溶液 取一點再用一樣的primer PCR看看. 能不能p出一樣的band. 2.做gel extraction 不一定要配成0.8% 也能work吧. 3.如果真的不確定是不是你的insert，可送定序. (應該沒必要到
#1
[問題] DNA elute後大小變了
推噓3(3推 0噓 1→)留言4則，0人參與, 最新作者Fourfish (我是？ ￾    )時間19年前 (2006/08/14 17:10), 編輯資訊
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之前把PCR product接到TA vector確定insert進去後. 現在要把insert用RE切下來 （double digest）. RE過後 先用平常DNA電泳的agarose（1.5％）跑過. 確定有東西且在"1500bp"左右. 現在問題來了..... 我把相同的RE後產物 跑完lo
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