Re: [問題] DNA elute後大小變了
※ 引述《Fourfish (我是？    )》之銘言：
: 之前把PCR product接到TA vector確定insert進去後
: 現在要把insert用RE切下來 （double digest）
: RE過後 先用平常DNA電泳的agarose（1.5％）跑過
: 確定有東西且在"1500bp"左右
: 現在問題來了....
: 我把相同的RE後產物 跑完low melting agarose
: (我們家用同樣agarose粉末 不過是配成0.8%的膠)
: 切膠、用kit把DNA elute出來
: 再跑電泳（1.5%膠）確定 結果大小卻掉到"1000bp"多一點......
: 想請問這什麼回事...
: 只是經過切膠純化怎麼大小就變了...實在不敢確定那是我要的insert片段
: 可以指點我一下嗎...謝謝^^
我之前作也有這樣的狀況
因為我作的是promoter的部分，所以學長認為可能形成一些2ndary structure
我把elution product拿去加熱到65度10分鐘後放回冰上
size的確有恢復
但是冰到-20下次用的時候又變小了...
而且，ligation還是不成功
所以不太確定到底是什麼原因造成的
老師覺得是水太酸，DNA都斷掉了，可是又斷得太整齊了吧！
後來用kit附的elution buffer就解決了
不過還有一點奇怪的是，最近用水去elute又很正常了
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子在床上曰：「睡覺真舒服！不捨晝夜。」
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◆ From: 140.109.40.45
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