討論串(共23篇) - [問題] Real-time PCR - 看板Biotech

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討論串[問題] Real-time PCR

共 23 篇文章

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#18

Re: [問題] Real-time PCR

推噓0(0推 )留言0則，0人參與作者mandible (生化...go go go !!)時間19年前 (2006/12/19 13:26)資訊

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想請問你r大. 你在做q-pcr時. 利用RNA做PCR作為NEGATIVE CONTROL時. 是否有偵測到螢光?若有Ct大約為多少?. --. ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc). ◆ From: 203.64.49.5.

#17

Re: [問題] Real-time PCR

推噓0(0推 )留言0則，0人參與作者rpr (Cathy)時間19年前 (2006/12/17 18:13)資訊

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其實,抑制物這個問題也不是無法可解. 主要就是減少template 的量. 但是咧,這又牽涉到你的template濃度的問題了. 雖說real-time PCR最少可以偵測到的RNA在pg等級(應該沒記錯). 但是你的template濃度到底要下多少,這恐怕要稍微考慮一下. 下的多,template

#16

Re: [問題] Real-time PCR

推噓0(0推 )留言0則，0人參與作者lakerjackt (NN )時間19年前 (2006/12/17 15:38)資訊

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謝謝......我了解可能就是做的長度太長.... 那我想問一下......cDNA不純有沒有可能抑制real-time的表現. 其實就是cDNA裡頭有剩餘的dNTP或可能會抑制的buffer...有辦法解決嘛??. --. ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc). ◆ From: 218.16

#15

Re: [問題] Real-time PCR

推噓0(0推 )留言0則，0人參與作者rpr (Cathy)時間19年前 (2006/12/17 00:41)資訊

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不客氣,大家一起討論求進步嘍~~. PCR需求比real-time PCR寬鬆很多,. 請不要以為"PCR做的出來就一定沒問題"比較好喔!. 雖然說你的RT是東湊西湊kit做出來的. 我想你的RNA轉cDNA這一步非常的奇怪喔! 你有測過RNA得OD260/280嗎?. 一般都是用1-2ug去轉c

(還有278個字)

#14

Re: [問題] Real-time PCR

推噓0(0推 )留言0則，0人參與作者lakerjackt (NN )時間19年前 (2006/12/16 21:08)資訊

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我的檢體有兩部分,一種病人,一種正常人,..起初是認為怕抽不太夠.... 我現在正常人用invtrogen的kit去抽,回溶30ul,30ul全部轉,轉的總體積約100ul. 而病人用微晶出的pre-roche(好像有拼錯..哈)的kit去抽,回溶100ul,. 分三管去轉,每管加30ul的RNA,

(還有167個字)

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