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討論串[問題] Real-time PCR
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#8
Re: [問題] Real-time PCR
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者redhawk ( )時間19年前 (2006/12/16 14:05), 編輯資訊
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基本上,的確是PCR做的出來的,q-PCR也應該要看到結果. cDNA的純度真的很重要, 不只是在轉cDNA的過程. 先前準備RNA的步驟也有很大的影響. 尤其是處理酒精的步驟, 不夠乾淨俐落的話, 是會影響深遠的^^". 另外, 不知道你轉cDNA是用OligodT或是random hexmer呢
#7
Re: [問題] Real-time PCR
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者lakerjackt (N￾N )時間19年前 (2006/12/15 22:06), 編輯資訊
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哈....這是事實...... 我的cDNA目前真的PCR做的出來....用的primer還是用跨intron的.... 但real-time就是做不出來..... 所以我才頭大阿!!!. (ABI廠商是說我cDNA沒轉好..但我cDNA就是有轉成功阿.... 就一直說我的cDNA不夠純...所以請
#6
Re: [問題] Real-time PCR
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者mandible (生化...go go go !!)時間19年前 (2006/12/15 21:27), 編輯資訊
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你覺得pcr做的出來!q-pcr會做不出來嗎??. 那你可能有點誤導q-pcr的原理唷!. --. ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc). ◆ From: 210.85.124.41.
#5
Re: [問題] Real-time PCR
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者lakerjackt (N￾N )時間19年前 (2006/12/15 19:31), 編輯資訊
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我想請問各位做real-time PCR的高手.... 若cDNA轉不好(就是一般PCR做的出來,但real-time卻做不出來). 那可能就是不夠純...請問除了重轉外..有沒有其他可以補救的方法嗎?. 拜託各位!!. --. ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc). ◆ From: 218.
#4
Re: [問題] Real-time PCR
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者bloodgas (奶油ˊ的夢)時間19年前 (2006/12/15 18:58), 編輯資訊
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1.是的,要盡可能精準. 2.我們實驗室用的是Roche的機器,不過所有program的溫度跟時間都可以調整,因為每一個. 基因都不一樣,同樣的條件不可能適用於所有PCR,所以一定要optimization,ABI機器. 沒用過,所謂的不能改條件意思是????. 3.RNA用column抽或是TRI
(還有278個字)
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