Re: [問題] Real-time PCR
看板Biotech (生命科學)作者mandible (生化...go go go !!)時間19年前 (2006/12/15 21:27)推噓0(0推 0噓 0→)留言0則, 0人參與討論串6/23 (看更多)
※ 引述《lakerjackt (NN )》之銘言：
: 我想請問各位做real-time PCR的高手...
: 若cDNA轉不好(就是一般PCR做的出來,但real-time卻做不出來)
: 那可能就是不夠純...請問除了重轉外..有沒有其他可以補救的方法嗎?
: 拜託各位!!
你覺得pcr做的出來!q-pcr會做不出來嗎??
那你可能有點誤導q-pcr的原理唷!
: ※ 引述《bloodgas (奶油ˊ的夢)》之銘言：
: : 1.是的,要盡可能精準
: : 2.我們實驗室用的是Roche的機器,不過所有program的溫度跟時間都可以調整,因為每一個
: : 基因都不一樣,同樣的條件不可能適用於所有PCR,所以一定要optimization,ABI機器
: : 沒用過,所謂的不能改條件意思是????
: : 3.RNA用column抽或是TRIZOL抽都一樣,quality沒問題,reverse transcription只要沒有
: : RNase污染就沒問題
: : 4.要check RNA quality就直接跑個gel來看,28S/18S的band正確,比例也正確就可以
: : 5.crossing point 40是太低了,應該就是沒有東西吧...你測過抽出來的RNA的濃度嗎?
: : 你是用多少total RNA下去做reverse transcription? 一般都用0.5-1 ug, 另外,
: : 你做過house keeping gene的real-time PCR嗎?這樣可以直接確定你的cDNA有沒有問題.
: : 還有一點就是可以加上一個positive control,plasmid或是PCR fragment,這樣才能
: : 確定至少real time PCR的過程沒有問題..
: : 以上
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