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討論串[請益]請問如何表達toxic protein在BL21(DE3)ꤠ…
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#6
Re: [請益]請問如何表達toxic protein在BL21(DE3)ꤠ…
推噓2(2推 0噓 1→)留言3則，0人參與, 最新作者Ren (wisc)時間18年前 (2007/08/20 02:08), 編輯資訊
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再補充一下好了，免得說得大家不敢用。. 其實一開始還蠻簡單的，就是要refine condition的時候變因會比較多，. 最後要fix condition得試比較多條件。. day1: fresh transformation with SOC recovery for 1 hour. (1700
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#5
Re: [請益]請問如何表達toxic protein在BL21(DE3)ꤠ…
推噓0(0推 0噓 2→)留言2則，0人參與, 最新作者Ren (wisc)時間18年前 (2007/08/16 09:58), 編輯資訊
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補充一點，如果M9養不好，還是就用LB吧。. 方式也差不多，就50%LB開始，最後再加（粉末）LB.，不過一開始的比率其實是很. 需要嘗試的。. 所以建議還是用rich medium先才對。TB, LB, celtone etc.確定真的有. 東西再繼續。否則就不是菌表現的問題。. 另外養M9的時候
(還有80個字)
#4
Re: [請益]請問如何表達toxic protein在BL21(DE3)ꤠ…
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者Ren (wisc)時間18年前 (2007/08/16 08:50), 編輯資訊
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Yes.. 嗯。但實際上在inoculate的過程中，可以測試最大 OD_600nm.. 像以正常的 x mL LB->20/50mL M9->1L M9，這個20 or 50mL. 就可以大概知道這次的medium and colony可以長到最多多少，. 當然這會讓你slightly over-
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#3
Re: [請益]請問如何表達toxic protein在BL21(DE3)ꤠ…
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者qumai (._.)時間18年前 (2007/08/15 22:15), 編輯資訊
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借用一下文章. 剛好也有這樣的問題^^a請問是一開始就加入2g α-D-Glucose/Glc. 然後養到OD>1.0嗎我目前嘗試在前面加上signal peptide. 還是看不到有表現orz. 而且..BL21(DE3)本身. 會有兩個蠻粗的band在18.4及25 kDa的地方. 很容易誤會是
#2
Re: [請益]請問如何表達toxic protein在BL21(DE3)ꤠ…
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者Ren (wisc)時間18年前 (2007/08/15 06:33), 編輯資訊
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※ 引述《iamlittlee.bbs@ptt3.cc (go!go!!go!!!)》之銘言：. 先養到1L, (e.g. M9) OD>1.0 (2g α-D-Glucose/Glc). 然後再加IPTG(or 或用來induce的藥品）以及另外2g Glc.(if using. stock so
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