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討論串[求救] TA cloning一直失敗.....
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#3
Re: [求救] TA cloning一直失敗.....
推噓3(3推 0噓 0→)留言3則，0人參與, 最新作者puec2 (^^y)時間18年前 (2008/06/12 21:23), 編輯資訊
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分享我個人的經驗。. 我曾經做過一個TA cloning，一個月都做不出來。當時想怎麼可能？TA cloning從大學. 做到碩士畢業，沒有上百也有數十次，只有colony的多寡，不可能會完全做不出來。. 我當時遇到的情形是，比例調得再完美，再細心，就是沒有白色的colony，就算是藍色的也很少。.
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#2
Re: [求救] TA cloning一直失敗.....
推噓4(4推 0噓 3→)留言7則，0人參與, 最新作者reteporeh (颱風也喜歡放假)時間18年前 (2008/06/08 13:52), 編輯資訊
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我也用過同家公司的TOPO TA cloning. 我做過的話2.2kb都是一次就成功了. 都是直接照公司來的protocol做. 所以我想你的1.8kb應該是很好接上去的. 切膠回收的話我想你的PCR濃度就會降低. 而且A' overhang也很容易掉. 不過產物比較純..可以排除掉一些非majo
(還有345個字)
#1
[求救] TA cloning一直失敗.....
推噓12(12推 0噓 14→)留言26則，0人參與, 最新作者owl628 (owl628)時間18年前 (2008/06/04 11:44), 編輯資訊
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我用的是invitrogen的TOPO TA Cloning. 用Tag P出我的要的片段,約1800b.p. 加4ul和1ul的salt solution及1ul的TA vector作用. (22度西 30分鐘). 接著用自己做的competent cell(DH5α)做CaCl2 transfo
(還有19個字)
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