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討論串[求救]請問PCR products用restriction enzymeꐠ…
共 10 篇文章
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#5
Re: [求救]請問PCR products用restriction enzymeꐠ…
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者Fourfish (～四條魚～)時間17年前 (2008/08/14 11:46), 編輯資訊
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PCR的condition似乎沒問題（畢竟你都跑出來了...XD）. 但Restriction enzyme的濃度有點不對喔！. protocal的體積是20ul 你自己提升到25ul的話 buffer的量也要依比例做調整. 你指的很淡是切出來的產物對吧？. 原因是. 1.你的DNA已經先被稀釋了5
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#4
Re: [求救]請問PCR products用restriction enzymeꐠ…
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者tsubasawolfy (悠久の翼)時間17年前 (2008/08/14 11:22), 編輯資訊
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PCR完的product要clean up後測OD才準吧...不然你也只會測到一堆primer. 如果直接拿去切...你所說的100bp以下也有可能是primer dimer. 所以就是要先把primer 先去除後再考慮你說的問題. 所以呢 應該有兩個方法. 1.用PCR purification
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#3
Re: [求救]請問PCR products用restriction enzymeꐠ…
推噓2(2推 0噓 6→)留言8則，0人參與, 最新作者calmato (Anita~)時間17年前 (2008/08/14 11:04), 編輯資訊
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不好意思~因為我是第一次接觸分生~很多東西都是自己try. 或找資料或問人~所以有很多東西~不知該怎麼問或該注意什麼. ~所以真的很不好意思~遇到很多問題卻自己一直沒法解決 >"<. 廠商給的information 是只有說 To make 100uM stock solution. add 255
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#2
Re: [求救]請問PCR products用restriction enzymeꐠ…
推噓3(3推 0噓 2→)留言5則，0人參與, 最新作者albertwang (會思考的魚)時間17年前 (2008/08/14 09:44), 編輯資訊
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通常廠商給的都是儲放的濃度不是working的濃度. 妳老師用的方法沒錯因為這樣不用浪費純化kit的錢. 如果你量太多的話可以考慮用酒精沉澱. 我以前做過96*8的量是去做sequencing. 不用ㄧ個小時. 還有你的問題應該還有粉多. 不過你這樣問法沒濃度沒用量要知道問題在哪滿難的. 所以你把你
#1
Re: [求救]請問PCR products用restriction enzymeꐠ…
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者calmato (Anita~)時間17年前 (2008/08/14 09:29), 編輯資訊
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不好意思~我是這篇文章真正的發問者. 關於primer我是照廠商給的單子上面有寫該加多少水而去稀釋的. 所以如果是濃度太高~我還可以自行稀釋嗎?. 另外~是有老師教我要去切前做純化~但他教的方式是使用一種. 濾紙將pcr products 滴上去幾秒再吸回來~這樣的確是會loss. 掉不少的samp
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