Re: [求救]請問PCR products用restriction enzymeꐠ…

看板Biotech (生命科學)作者 (會思考的魚)時間17年前 (2008/08/14 09:44), 編輯推噓3(302)
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※ 引述《calmato (Anita~)》之銘言: : 不好意思~我是這篇文章真正的發問者 : 關於primer我是照廠商給的單子上面有寫該加多少水而去稀釋的 : 所以如果是濃度太高~我還可以自行稀釋嗎? 通常廠商給的都是儲放的濃度不是working的濃度 : 另外~是有老師教我要去切前做純化~但他教的方式是使用一種 : 濾紙將pcr products 滴上去幾秒再吸回來~這樣的確是會loss : 掉不少的sample 而且非常耗時~他說這樣的目的只是去除掉一些 : 鹽類~~但又由於我的sample量之大~我真的沒有心力再一管一管 : 的去做這樣的事~(但如果各位的建意是最好還是做的話~那我還是 : 就會乖乖的做這步驟) 妳老師用的方法沒錯因為這樣不用浪費純化kit的錢 如果你量太多的話可以考慮用酒精沉澱 我以前做過96*8的量是去做sequencing 不用ㄧ個小時 還有你的問題應該還有粉多 不過你這樣問法沒濃度沒用量要知道問題在哪滿難的 所以你把你反應的條件poㄧ下那才能知道你的問題 : 因此,以上~不知各位前輩有沒有什麼覺得小妹我該注意或該做些 : 什麼?請不吝指較~感激不盡!! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.114.96.242

08/14 10:39, , 1F
會用濾紙是因為體積(單一樣本)超過機器可以離心的容量了吧
08/14 10:39, 1F

08/14 10:43, , 2F
要是單一樣本量太大,先沉澱抽乾,再用少一點體積的水回溶
08/14 10:43, 2F

08/14 10:44, , 3F
就可以得到較濃的DNA stock,再去做後面的實驗...
08/14 10:44, 3F

08/14 10:45, , 4F
抱歉忘了補,大體積離心要用到超高速離心G力才會夠,請注意...
08/14 10:45, 4F

08/14 11:06, , 5F
sorry~忘了說~我所說的sample大是指很多不同的樣本
08/14 11:06, 5F
文章代碼(AID): #18euuN_T (Biotech)
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