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討論串[求救] 點狀轉漬
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#5
Re: [求救] 點狀轉漬
推噓1(1推 0噓 0→)留言1則，0人參與, 最新作者slash7788 (800公里的，答案)時間17年前 (2008/09/05 10:22), 編輯資訊
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control有抓到是一定的阿 重點是你想看的東西有沒有出來吧. 況且control是一定會dilute的. 反正dot blot都會點很多點了. 不如就做dilute的gradient. 比較擔心的是 你純化的蛋白沒轉出來 反而只有control很黑. 如果只是想讓圖漂亮一點的話 就分兩張pvdf
(還有127個字)
#4
Re: [求救] 點狀轉漬
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者crement (cometoseeme)時間17年前 (2008/09/04 22:17), 編輯資訊
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因為現在作WB，除了染想要染的蛋白，. 通常還要染其他的東西，. 像是loading control用的actin or GADPH。. 這個時候就是不行的。. 如果你的抗體不好，會認超過一個蛋白（這種事情常發生），. 一般的PAGE你可以用分子量分開，. DOT BLOT就不行了。. --. 過去
#3
Re: [求救] 點狀轉漬
推噓1(1推 0噓 2→)留言3則，0人參與, 最新作者REIDO (醫工所昏迷中)時間17年前 (2008/09/04 18:20), 編輯資訊
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我想請教一下，為什麼抗體要很好才有辦法呢？. 我之前也有想過，假設只測一個protein。. 之前跑過WESTERN確認抗體的專一性，目標分子量也正確，而且PVDF的capacity也夠，. 那為什麼不一開始就直接把sample加到PVDF或NC上面，然後從blocking開始？. 照上面的說法，點
(還有47個字)
#2
Re: [求救] 點狀轉漬
推噓1(1推 0噓 0→)留言1則，0人參與, 最新作者allisa (小晴)時間17年前 (2008/09/04 16:58), 編輯資訊
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做過 但是我們都是load純化過的protein 看跟某蛋白會不會interaction. 點會暈開應該是把蛋白點上去的時候沒點好吧. 點的範圍不要太大 要一點一點滴上去 讓他抽乾再點. 一次點太多液體上去一下就擴散開了. --. ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc). ◆ From: 140
#1
[求救] 點狀轉漬
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者kakaman (日子過的真快阿)時間17年前 (2008/09/04 16:13), 編輯資訊
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有人做過protein dot blot嗎?. 就是把PVDF活化後 放在一個像96孔盤的裝置上. 藉由抽氣 將蛋白質轉印在PVDF上. 接著就像western一樣了. 我load的蛋白是total protein. 我知道除非抗體很好 不然用這方法實在不怎麼恰當. 但是現在遇到一個問題是. 我的c
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