Re: [求救] 點狀轉漬
※ 引述《kakaman (日子過的真快阿)》之銘言：
: 有人做過protein dot blot嗎?
: 就是把PVDF活化後 放在一個像96孔盤的裝置上
: 藉由抽氣 將蛋白質轉印在PVDF上
: 接著就像western一樣了
: 我load的蛋白是total protein
: 我知道除非抗體很好 不然用這方法實在不怎麼恰當
: 但是現在遇到一個問題是
: 我的control只有load RIPA buffer 居然也有點 還超黑...
control有抓到是一定的阿 重點是你想看的東西有沒有出來吧
況且control是一定會dilute的
反正dot blot都會點很多點了
不如就做dilute的gradient
比較擔心的是 你純化的蛋白沒轉出來 反而只有control很黑
如果只是想讓圖漂亮一點的話 就分兩張pvdf紙吧
了不起比較浪費抗體 如果你們家有錢的話 科科
一張做control的gradient(還可以順便抓時間)
另一張看你想要抓的東西有沒有被純化
另外就是看你是怎麼染的
我之前有用過cy3 & cy5來染 感覺效果還不錯
有機器 有錢的話 可以考慮看看
: 而且常常有些會點暈開 一個點出錯 就要重來
點和點之間 會自己留距離阿 會遇到暈開 是因為濃度太高了
如果濃度很低還是暈開 就是抗體有問題(代表沒專一性)
另外我還有遇過 安加奶粉擺太九 做出來也是很怪
: 想問 板上有人有做這個的經驗嗎
: 可以給我一點意見嗎?
希望有幫到你的忙
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09/06 01:15, , 1F
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