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討論串[求救] competent cell製作
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#4
[求救] competent cell製作
推噓8(8推 0噓 9→)留言17則，0人參與, 最新作者dodomilk (豆漿)時間16年前 (2010/06/03 15:46), 編輯資訊
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我們實驗室想作的是一種叫XL10-gold的E.coli, strategene的產品. 因為有TetR基因, 所以我在養菌時加了Tet 20ug/ml. 不過作出來的菌居然可以在有Amp的LB plate上長滿滿的...不是一顆顆, 是一整片. 是不是有污染呢？. 或者是有Tet抗性的菌會影響對A
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#3
Re: [求救] competent cell製作
推噓4(4推 0噓 5→)留言9則，0人參與, 最新作者bolly (bolly)時間17年前 (2008/10/01 01:15), 編輯資訊
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我今天又試了一次 在製作過程我都盡量在冰上處理. 我也是用離心管操作 所以置於冰上的步驟也都是整支插進冰裡. 最後一步分裝好之後 我拿了一管直接塗在無抗生素的菌盤上. 在拿另一管作transform. 我的transform步驟是加入1-2ul DNA到0.2ml competent cell. 置
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#2
Re: [求救] competent cell製作
推噓2(2推 0噓 1→)留言3則，0人參與, 最新作者tsubasawolfy (悠久の翼)時間17年前 (2008/09/30 19:59), 編輯資訊
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前置. 1. CaCl2. 60mM CaCl2----2.088g. 15% Glycerol-30mL. 10mM PIPES----0.6048g. -----------------------. add ddw to 200mL. 2.加熱溶解後冷卻. 3.滴定pH到 7.0. 4.滅菌後
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#1
[求救] competent cell製作
推噓7(7推 0噓 12→)留言19則，0人參與, 7年前最新作者bolly (bolly)時間17年前 (2008/09/30 13:35), 編輯資訊
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我們實驗室之前都是直接買kit作transform. 但是我覺得有點浪費 所以想試著自己作作看. 我用一瓶看起來有點年代的氯化鈣配製成0.1M溶液(已滅菌). 將0.5ml over-night菌液加入50ml LB養到OD 0.4. 3200g離心去除上清液 加入20ml氯化鈣使懸浮. 置冰上40
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