PTT職涯區 / Biotech (生命科學)

[求救] competent cell製作

看板Biotech (生命科學)作者 (豆漿)時間16年前 (2010/06/03 15:46), 編輯推噓8(8推 0噓 9→)
留言17則, 7人參與, 最新討論串4/4 (看更多)
我們實驗室想作的是一種叫XL10-gold的E.coli, strategene的產品 因為有TetR基因, 所以我在養菌時加了Tet 20ug/ml 不過作出來的菌居然可以在有Amp的LB plate上長滿滿的...不是一顆顆, 是一整片 是不是有污染呢？ 或者是有Tet抗性的菌會影響對Amp的抗性？(應該不會吧...) 大概說一下我的作的過程 從-80度冰箱挖一些XL10-gold, 種到含20 ug/ml Tet, 50 ml LB的錐形瓶, 37度隔夜 取200 ul culture, refresh到另一個含20 ug/ml Tet, 50 ml LB的錐形瓶 OD = 0.35的時候冰浴10 mins, 4000 rpm 轉 10 mins, 倒掉上清液 在冰上用12 ml過濾過的氯化鈣溶液(包含一些其他鹽類及甘油)resuspend 冰浴10 mins, 4000 rpm 轉 10 mins, 倒掉上清液 在冰上用4 ml氯化鈣溶液resuspend, 分裝, 每100 ul一管 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.114.44.46
推
06/03 16:11, , 1F
他本身不會抗Amp...
06/03 16:11, 1F
→
06/03 16:12, , 2F
不然他附的pUC18 control不就附心酸的..
06/03 16:12, 2F
推
06/03 16:35, , 3F
做過XL-Blue 本身不會抗Amp 看來是貴lab的stock 有問題~
06/03 16:35, 3F
推
06/03 19:20, , 4F
之前做competent cell有污染的時候也是長一整片怪東西
06/03 19:20, 4F
→
06/03 19:20, , 5F
如果用stock去塗盤看看有沒有污染呢?
06/03 19:20, 5F
→
06/03 19:21, , 6F
不然就重做一次吧～可能是做的過程中有污染問題
06/03 19:21, 6F
推
06/03 22:33, , 7F
XL-10 gold可以自己做喔? 之前買一管1000多，超貴!
06/03 22:33, 7F
推
06/03 22:58, , 8F
competent cell都可以自己做呀～只是效率沒有買的好啦
06/03 22:58, 8F
→
06/03 23:35, , 9F
我都一次做2個紙盒說, Amp 20/ug/ml 不會有點少嗎@@?
06/03 23:35, 9F
→
06/03 23:36, , 10F
我是用50~100ug/ml
06/03 23:36, 10F
→
06/03 23:36, , 11F
這菌會長得比較快, 時間比DH5a少大概2hr吧
06/03 23:36, 11F
推
06/03 23:59, , 12F
我說XL-10 gold
06/03 23:59, 12F
→
06/04 00:00, , 13F
抱歉 我會錯意了
06/04 00:00, 13F
推
06/04 12:45, , 14F
你塗盤有沒有塗乾壓，會不會是因為你的菌根本沒有乾也會長
06/04 12:45, 14F
→
06/04 12:46, , 15F
成整盤都是菌，而不是一顆顆的菌，如果是一顆顆的那汙染了
06/04 12:46, 15F
→
06/04 12:47, , 16F
就重新由頭開始試吧
06/04 12:47, 16F
推
06/04 14:10, , 17F
Ap很容易就會失效的~建議重配 加上plate也要50ug/ml
06/04 14:10, 17F
抱歉，後來再測試一次之後，認為應該是我把有作pUC18(含ampR) transformation 和沒作的搞混了...搞笑了，對不起... ※ 編輯: dodomilk 來自: 123.195.13.126 (06/04 19:11)
‣ 更多 dodomilk 的文章
文章代碼(AID): #1C1rt6fR (Biotech)
Biotech 近期熱門文章
更多 近期熱門文章 >>
PTT職涯區 即時熱門文章
更多 即時熱門文章 >>
‣ 更多 dodomilk 的文章
文章代碼(AID): #1C1rt6fR (Biotech)