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討論串[求救] 有關PCR的問題
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#7
Re: [求救] 有關PCR的問題
推噓1(1推 0噓 2→)留言3則，0人參與, 最新作者Ianthegood (雜碎。)時間10年前 (2015/02/13 10:35), 編輯資訊
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腦補. 默默的覺得你的vector可能有一個點換錯地方了XD. chromosome被重組. 所以有抗性 但是p不出來. 可以多用幾組primer交叉測試一下. 或是看一下crossover的點有沒有辦法在genome裡面blast到其他東西. 然後mycycler好像要升級才能用gradient.
#6
Re: [求救] 有關PCR的問題
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者polomi (polomi)時間10年前 (2015/02/13 10:34), 編輯資訊
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不好意思，. 打擾了~~. 其實我是使用這個KIT組. Ecoli Gene Deletion Kit. http://www.genebridges.com/products/quick-easy-e-coli-gene-deletion-kit. 因為之前一直無法成功P出所想要的序列，. 所以就
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#5
Re: [求救] 有關PCR的問題
推噓1(1推 0噓 0→)留言1則，0人參與, 最新作者licat (licat)時間10年前 (2015/02/12 23:18), 編輯資訊
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那你原本設計用來確認重組狀況的primer，離置換位置有段距離. 會讓PCR困難度變高，可以考慮設計得近一點. (不過看你PCR的圖，這應該不是做不出來的主因). 我用過這個系統，跟其他互換系統相比沒那麼順利. 雖然看起來很簡單但不容易除錯，DNA電進去後都不知道出了啥事. 如果你能找到用得很順的人
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#4
Re: [求救] 有關PCR的問題
推噓0(0推 0噓 2→)留言2則，0人參與, 最新作者polomi (polomi)時間10年前 (2015/02/12 09:40), 編輯資訊
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去除的片段長度約為450 bp，. 而使用插入取代的抗性片段約為1.6 KB。. 利用kanamycin 15ug/ml，. 互換的機制是同源重組交換的方式。. 有一個大陸的網站寫得滿淺顯易懂的，. http://www.yrbio.com/service/red-et-recombination-
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#3
Re: [求救] 有關PCR的問題
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者licat (licat)時間10年前 (2015/02/11 20:51), 編輯資訊
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不好意思因為資訊太少，我想問一些問題便於判斷. 請問想去除的片段長度多大？. 請問是甚麼抗生素基因？使用的互換機制是？. （抗生素基因是帶在質體上？或著你送入的是線狀DNA？）. 然後你應該是使用在抗生素盤上長出來的菌落去抽DNA、做後續PCR吧？. 我覺得不像是PCR或抽DNA的問題，. 因為你的
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