Re: [求救] 有關PCR的問題
不好意思因為資訊太少，我想問一些問題便於判斷
: : 如果是失敗的會保留原長度約為1.1KB，
請問想去除的片段長度多大？
: 是對genomic DNA上的目標基因利用一段具有抗生素抗性基因做取代。
請問是甚麼抗生素基因？使用的互換機制是？
（抗生素基因是帶在質體上？或著你送入的是線狀DNA？）
然後你應該是使用在抗生素盤上長出來的菌落去抽DNA、做後續PCR吧？
: 是不是要再另外購買什麼或是連絡廠商才能打開機器的權限?
我覺得不像是PCR或抽DNA的問題，
因為你的control反應很專一，這種PCR你沾一點菌落或菌液直接當模板都做得出來
所以你沒夾出來，我覺得比較可能是
1. 那些長出來的菌落是污染的雜菌，沒有你primer可認得的序列
（如果你提供詳細實驗流程跟結果：
像是怎麼送入DNA？塗盤後生長菌落數？會比較好判斷）
2. 那些菌落都是insertion mutants，然後你primer座落的位置被互換掉了
（這得看primer座落位置跟整個互換的設計）
3. 那些菌落都是insertion mutants，primer也沒錯，
但PCR反應沒有強到可以夾出2 KB大小，所以你可以：
(1) 將annealing降到50，沒出來再降到45，再沒出來就放棄
(2) 換別的廠牌的taq，直接測試50跟45度annealing
(3) 重新設計其他primer
我想你可以先測試上述的PCR條件，
希望你annealing溫度一降就夾出來，問題解決~
祝實驗順利
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