[求救] 有關PCR的問題
版上大家好~
小弟目前正在進行有關E. colo同源重組的實驗，
最終的確認是使用PCR判斷有無成功的插入到genomic DNA上。
如果是失敗的會保留原長度約為1.1KB，
成功的話會改變其長度。
PCR都是使用相同的primer跟相同的溫度條件設定。
萃取完DNA後，
也有使用DNA clean kit做純化的動作。
有測量OD260/280算濃度。
每管每次PCR添加的genomic DNA template都固定約為200~300ng。
使用的polymerase為 ACCU DNA polymerase。
http://www.yeastern.com/Products.php?pid=169&pkid=10&pttype=60
按照原廠建議使用。
primer最終濃度為0.2uM
dNTP 最終濃度為 0.1mM
每次都固定50ul
可是最近幾次的PCR都無法出現結果。
有使用先前成功的template做對照。
有附圖說明，請參考。
http://ppt.cc/to8T
均為同時跑PCR的結果。
PCR buffer是先除去template跟polymerase外先混合均勻，
再分別添加的。
各項溫度的設定並未改變。
請問我有哪裡需要再做改變的?
麻煩各位了
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