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Re: [問題] 請教研究助理轉職的跑道？

看板Bioindustry (生物科技)作者時間17年前 (2008/11/29 19:36), 編輯推噓3(3推 0噓 38→)
留言41則, 8人參與, 最新討論串4/4 (看更多)
※ 引述《kaede178 (愛愛愛)》之銘言： : 但是比起外面的私人公司來講 : 學校老闆的要求和期待真的非常客氣了 : 私人公司常常也是朝令夕改 你以為 PI就不會朝令夕改嗎?? 我的老闆還很天兵的 要我一個細胞裡同時transfect 兩個plasmid 一個是target gene 另一個是EGFP(當篩選marker) 白癡到極點 : 因為花錢的是老大,你不滿意就自己走人 你以為 PI就不會叫你走人嗎?? 我的老闆 每天跟我靠腰說 助理六日也要來做實驗 : 想投訴嗎?唉,在人屋簷下不得不低頭 : 我以前實驗做的好,老闆說:不錯,繼續保持下去 : 現在業務做的好,老闆說:明年你要更好,做不到就等著...(難怪辦公室人人健檢都是紅字) : 以前實驗遇到瓶頸,老闆說:加油,再撐一下,做出來我們這篇可以發5點的paper,慶功..... 你以為 PI就不會對你說"今年要發2點,明年要發5點,後年要PNAS" "助理一年沒有paper 就等著..." : 相對外面工作,現在景氣這麼差,被老闆盯的滿頭包 這與是不是當助理無關 只能說 你遇到了一個爛人 -- -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.109.50.106
推
11/29 20:29, , 1F
我以前在中研院生醫所的老師 就常常恐嚇助理
11/29 20:29, 1F
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11/30 11:09, , 2F
Co-transfection 不對嗎？挑 clone 很麻煩就是了...
11/30 11:09, 2F
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11/30 16:26, , 3F
我也想知道為什麼不能co-transfection
11/30 16:26, 3F
一個 plasmid 是target gene 另一個plasmid是EGFP當 marker用 轉基因完後 用以第二個plasmid當marker用flow去挑帶有target gene的clone 這是個很爛的點子... ※ 編輯: genewing 來自: 140.109.50.106 (11/30 18:02)
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11/30 18:43, , 4F
如果沒有marker這樣並沒錯,重點是這樣就罵這老闆白癡著實?
11/30 18:43, 4F
也罷..我覺得你完全沒有相關的實驗經驗... 用白話文說 要marker的話 最基本的 至少應該將EGFP與target gene接在同一個plasmid上 (但是實務與理論還是兩件事......) 這點技術 只要是有點分子生物學背景的人 都知道該怎麼做 完全沒有技術難度... 我老闆只是單純連一個星期的工作時間都不願意等而已 ※ 編輯: genewing 來自: 140.109.50.106 (11/30 20:45) ※ 編輯: genewing 來自: 140.109.50.106 (11/30 20:59)
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11/30 21:15, , 5F
你肯定錯了,許多沒有marker的,會用co的方式選好比例送進去
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11/30 21:16, , 6F
當然paper也這麼做過,不需要額外接clone
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11/30 21:25, , 7F
這麼快就對老闆或別人下定論,在別人眼裡看來就十足像個新手
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11/30 22:34, , 8F
EGFP 跟 target gene 都用同樣的 promoter的話,
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11/30 22:36, , 9F
重新 construct 很快沒錯。
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11/30 22:38, , 10F
如果一個是 pol II 另一個是 pol III, 麻煩點....
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11/30 22:39, , 11F
不過中研院有錢，去買就好了
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12/01 04:58, , 12F
B大如果覺得可行...那您就用這方法做好了...
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12/01 05:00, , 13F
與其用啥鬼marker target gene有沒有真正的進入genome
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12/01 05:00, , 14F
然後表現 才是重點.....
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12/01 05:01, , 15F
用Co-transfection 最大的問題在於
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12/01 05:01, , 16F
你無法證明 "有螢光就代表有target gene"
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12/01 05:02, , 17F
b大你有辦法證明這點...我才相信你真的有做過實驗
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※ 編輯: genewing 來自: 140.109.50.106 (12/01 05:04)
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12/01 05:08, , 18F
補充一下 我們要的是 能穩定產出target protein的細胞
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12/01 05:19, , 19F
同一個plasmid上接EGFP 加 target gene....
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12/01 05:20, , 20F
最後有發螢光的細胞 都沒有target gene了 還co-transfect
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12/01 05:21, , 21F
只能說b大你是天才中的天才....
12/01 05:21, 21F
推
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老實說我也看過這種方式 這只是當做初步篩選的方法
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12/01 09:10, , 23F
就算你用同個Plasmid上的EGFP去挑clone 還是得養好幾株
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12/01 09:12, , 24F
細胞挑Stable Clone 這樣跟co transfection一樣還是得經過
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蛋白表現量的篩選 所以省去Construct過程也是可以的
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12/01 09:14, , 26F
風險是可能得挑很多的Clone來篩 但也有去除EGFP可能造成
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12/01 09:15, , 27F
的干擾的好處
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推
12/01 09:27, , 28F
co-trans只適合transient expression分析..
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12/01 09:29, , 29F
一般多用來做promoter assay用,若要做stable protein
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12/01 09:30, , 30F
expression的方式絕不是用這種半吊子的方法XD
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12/01 09:32, , 31F
市面上許多expression system都有flag..為何不用?
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12/01 09:41, , 32F
所以我說這是爛方法 而co-transfect 更爛......
12/01 09:41, 32F
※ 編輯: genewing 來自: 140.109.50.105 (12/01 09:43)
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12/01 09:45, , 33F
e大說的是IRES系統吧 那個也有試過............結局...
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12/01 09:51, , 34F
我不是說IRES,那個東西會有protein turn-over不一的
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12/01 09:51, , 35F
的問題,總之用一般的shuttle vector都不是好方法..
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12/01 10:03, , 36F
主要看貴Lab著重於蛋白質產出或分析用,面向方法不同
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12/01 10:23, , 37F
完全不加marker的方法 也有試過.但是事後驗證太耗時...
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12/01 10:24, , 38F
target gene 轉進去的機率又太低了.....
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12/01 10:25, , 39F
現在是加tol2系統提高轉基因的效率...
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12/04 11:39, , 40F
可以看得出您在transfection上很多經驗　你老闆真幸運
12/04 11:39, 40F
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12/04 22:02, , 41F
不...是實驗室很不幸的繞了很多遠路 我只是順便學經驗...
12/04 22:02, 41F
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