Re: 請問一個mRNA的問題
※ 引述《stamina.bbs@bbs.ntu.edu.tw (鬥志)》之銘言：
> 我正在進行一個蛋白質的研究
> 發現如果抽取組織mRNA做RT-PCR都有(positive)
> 尤其是在肝臟、腎臟、腦
> 但是到了蛋白質層次(Western blot)
> 卻只有腦才有
> 請問有可能是什麼因素呢？
> 那這樣做一堆mRNA出來卻從來不做成蛋白
> 不是浪費能量嗎？疑惑中......
先別如此斷言喔~
RT-PCR的人為操縱因素很多(有可能是錯的訊息),無法斷定一定有多少的transcripts
要的話做Nothern blot較能反映真實的表現情形。
照你的簡略描述看來,若腦才偵測的到蛋白質表現,我推斷有幾個可能因素
1. 其他組織的確有表現蛋白質,只是量很少,以western blot的靈敏度偵測不出來
2. 你RT時測到的positive signal,是硬被PCR出來的,真實狀態的transcripts可能非常少
3. 若各組織中的確都有很多此gene的mRNA,為何只有腦有protein可被測到呢?
(a. 其他組織的此protein degrade速度很快,只有腦中特別慢,所以才能被測到)
加個protease inhibitor做做實驗可能有辦法看出端倪
b. 若你用的是monoclonal antibody,可能在其他組織的epitope被遮住了~
glycosylation或phosphorylation都有可能影響signal~ )
有些protein的half-life非常短,但只要一被表現出來馬上就有立即的function
有很多protein一發揮function後隨即就被degrade掉,免得產生反效果對細胞不好~
當然囉~ 還有其他解釋方法啦,我只是略舉一二,你可以參考一下。
也許你的這個gene在translation上有特別的調控機制,蠻值得探討下去~
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※ Origin: 東海生物木棉站 <bbs.bio.thu.edu.tw>
◆ From: 218-166-76-217.HINET-IP.hinet.net
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