[問題] 想請教抽小鼠組織RNA260/280吸光值很低?
想請教各位大大,最近在使用Trizol抽小鼠RNA,
吸光值260/280都在1.3-1.6左右,大部分都在1.3到1.4左右,
我抽RNA層的總量抽差不多一半,吸光值260/280還是很低,老師說至少要1.8以上
下面是我的操作流程,是不是我抽RNA的過程有錯誤QAQ
1. 動物組織秤50mg,先剪成1Ⅹ1 mm2大小面積 在滅過菌的研缽倒液態氮磨碎
2. 加入1 ml Trizol pipetting(tip反覆抽吸)混合均勻,移至1.5 ml 滅菌過的離心
管。
3. 樣品在室溫靜置5分鐘。
4. 加入200μl氯仿(chloroform),震盪混勻15秒,室溫靜置15分鐘。
5. 以12,000 x g於4 °C離心15分鐘。
6. 離心後會分層,小心取上清液至新的滅菌過離心管,RNA在此層。
7. 加入500μl的2-丙醇(isopropanol),pipetting混合均勻。
8. 室溫靜置10分鐘,以12,000 x g於4 °C離心10分鐘。
9. 使用tip吸取上清液
10. 加入1 ml 75% 酒精(Ethanol),震盪混勻樣品。
11. 以7,500 x g於4 °C離心5分鐘。
12. 使用tip小心吸取酒精後,在laminar flow操作台風乾
13. 加入30μl ddH2O 回溶,pipetting 10-15分
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