[問題] 想請教抽小鼠組織RNA260/280吸光值很低?

看板Biology (生物學)作者 (小空)時間2年前 (2022/06/30 13:50), 2年前編輯推噓3(300)
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想請教各位大大,最近在使用Trizol抽小鼠RNA, 吸光值260/280都在1.3-1.6左右,大部分都在1.3到1.4左右, 我抽RNA層的總量抽差不多一半,吸光值260/280還是很低,老師說至少要1.8以上 下面是我的操作流程,是不是我抽RNA的過程有錯誤QAQ 1. 動物組織秤50mg,先剪成1Ⅹ1 mm2大小面積 在滅過菌的研缽倒液態氮磨碎 2. 加入1 ml Trizol pipetting(tip反覆抽吸)混合均勻,移至1.5 ml 滅菌過的離心 管。 3. 樣品在室溫靜置5分鐘。 4. 加入200μl氯仿(chloroform),震盪混勻15秒,室溫靜置15分鐘。 5. 以12,000 x g於4 °C離心15分鐘。 6. 離心後會分層,小心取上清液至新的滅菌過離心管,RNA在此層。 7. 加入500μl的2-丙醇(isopropanol),pipetting混合均勻。 8. 室溫靜置10分鐘,以12,000 x g於4 °C離心10分鐘。 9. 使用tip吸取上清液 10. 加入1 ml 75% 酒精(Ethanol),震盪混勻樣品。 11. 以7,500 x g於4 °C離心5分鐘。 12. 使用tip小心吸取酒精後,在laminar flow操作台風乾 13. 加入30μl ddH2O 回溶,pipetting 10-15分 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 125.227.200.221 (臺灣) ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biology/M.1656568234.A.7E2.html ※ 編輯: NoahArk (125.227.200.221 臺灣), 06/30/2022 13:52:40

07/09 14:06, 2年前 , 1F
ddH2O? 應該用DEPC水回溶吧
07/09 14:06, 1F

07/10 10:56, 2年前 , 2F
酒精可以多洗幾次 環境夠乾淨用滅菌水回溶也無妨
07/10 10:56, 2F

08/10 16:52, , 3F
水層不要太貪,盡量不要吸到白白的,試看看
08/10 16:52, 3F
文章代碼(AID): #1YlJcgVY (Biology)
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