Re: [問題] 想請教抽小鼠組織RNA260/280吸光值很低?

看板Biology (生物學)作者keratectomy (kerakera)時間7月前 (2024/05/18 20:28)推噓1(1推 0噓 0→)

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這個版大概已經近乎是荒廢狀態了也不知道發文者問題解決了沒發文者遇到的問題我認為是在第一步驟就要修正才能解決你動物組織是新鮮的嗎? 現採現秤? 絕大部分的軟組織都沒有用液態氮冷凍後磨碎的必要你組織愈新鮮愈好如果組織被冷凍過建議要在冷凍狀態就要進Trizol 而且是愈快磨開愈好另外就是最後一步不需要花這麼多時間去溶幾十秒就很夠了樣品應該盡可能維持在低溫狀態 ※ 引述《NoahArk (小空)》之銘言： : 想請教各位大大，最近在使用Trizol抽小鼠RNA， : 吸光值260/280都在1.3-1.6左右，大部分都在1.3到1.4左右， : 我抽RNA層的總量抽差不多一半，吸光值260/280還是很低，老師說至少要1.8以上 : 下面是我的操作流程，是不是我抽RNA的過程有錯誤QAQ : 1. 動物組織秤50mg，先剪成1Ⅹ1 mm2大小面積在滅過菌的研缽倒液態氮磨碎 : 2. 加入1 ml Trizol pipetting(tip反覆抽吸)混合均勻，移至1.5 ml 滅菌過的離心 : 管。 : 3. 樣品在室溫靜置5分鐘。 : 4. 加入200μl氯仿(chloroform)，震盪混勻15秒，室溫靜置15分鐘。 : 5. 以12,000 x g於4 °C離心15分鐘。 : 6. 離心後會分層，小心取上清液至新的滅菌過離心管，RNA在此層。 : 7. 加入500μl的2-丙醇(isopropanol)，pipetting混合均勻。 : 8. 室溫靜置10分鐘，以12,000 x g於4 °C離心10分鐘。 : 9. 使用tip吸取上清液 : 10. 加入1 ml 75% 酒精(Ethanol)，震盪混勻樣品。 : 11. 以7,500 x g於4 °C離心5分鐘。 : 12. 使用tip小心吸取酒精後，在laminar flow操作台風乾 : 13. 加入30μl ddH2O 回溶，pipetting 10-15分 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 172.58.1.213 (美國) ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biology/M.1716035316.A.A86.html