Re: [問題] 想請教抽小鼠組織RNA260/280吸光值很低?

看板Biology (生物學)作者 (kerakera)時間6月前 (2024/05/18 20:28), 編輯推噓1(100)
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這個版大概已經近乎是荒廢狀態了 也不知道發文者問題解決了沒 發文者遇到的問題我認為是在第一步驟就要修正才能解決 你動物組織是新鮮的嗎? 現採現秤? 絕大部分的軟組織都沒有用液態氮冷凍後磨碎的必要 你組織愈新鮮愈好 如果組織被冷凍過 建議要在冷凍狀態就要進Trizol 而且是愈快磨開愈好 另外就是最後一步不需要花這麼多時間去溶 幾十秒就很夠了 樣品應該盡可能維持在低溫狀態 ※ 引述《NoahArk (小空)》之銘言: : 想請教各位大大,最近在使用Trizol抽小鼠RNA, : 吸光值260/280都在1.3-1.6左右,大部分都在1.3到1.4左右, : 我抽RNA層的總量抽差不多一半,吸光值260/280還是很低,老師說至少要1.8以上 : 下面是我的操作流程,是不是我抽RNA的過程有錯誤QAQ : 1. 動物組織秤50mg,先剪成1Ⅹ1 mm2大小面積 在滅過菌的研缽倒液態氮磨碎 : 2. 加入1 ml Trizol pipetting(tip反覆抽吸)混合均勻,移至1.5 ml 滅菌過的離心 : 管。 : 3. 樣品在室溫靜置5分鐘。 : 4. 加入200μl氯仿(chloroform),震盪混勻15秒,室溫靜置15分鐘。 : 5. 以12,000 x g於4 °C離心15分鐘。 : 6. 離心後會分層,小心取上清液至新的滅菌過離心管,RNA在此層。 : 7. 加入500μl的2-丙醇(isopropanol),pipetting混合均勻。 : 8. 室溫靜置10分鐘,以12,000 x g於4 °C離心10分鐘。 : 9. 使用tip吸取上清液 : 10. 加入1 ml 75% 酒精(Ethanol),震盪混勻樣品。 : 11. 以7,500 x g於4 °C離心5分鐘。 : 12. 使用tip小心吸取酒精後,在laminar flow操作台風乾 : 13. 加入30μl ddH2O 回溶,pipetting 10-15分 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 172.58.1.213 (美國) ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biology/M.1716035316.A.A86.html

06/04 01:50, 5月前 , 1F
用戶減少,再加上也很少人念這科系了XD
06/04 01:50, 1F
文章代碼(AID): #1cI9xqg6 (Biology)
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