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討論串[請益] 自己表現的protein用來treat細胞
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#7
Re: [請益] 自己表現的protein用來treat細胞
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者pick30225.時間20年前 (2006/04/01 10:32), 編輯資訊
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※ 引述《allplanets.bbs@ptt.cc (craft in universe)》之銘言：. > ※ 引述《microball (研究院路的紫薇花)》之銘言：. > : 厄...你做出的蛋白有tag嗎？. > : 如果有的話可以用此純化，不然可能要用LC之類的純化？. > : 品質的話.
(還有569個字)
#6
Re: [請益] 自己表現的protein用來treat細胞
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者microball (研究院路的紫薇花)時間20年前 (2006/03/31 23:39), 編輯資訊
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嗯嗯...如果你要狠一點的話(或是後來發現 LC的儀器有困難). 可以用 tandem tag 做純化. 像是 Flag/His 或是 His/ V5之類的. 先用His抓蛋白下來，再用 antibody 抓一次，應該就非常純了. 基本上，無論做了多 high-quality 的純化. 還是無法證明
#5
Re: [請益] 自己表現的protein用來treat細胞
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者yehlin (幻想世界)時間20年前 (2006/03/31 18:59), 編輯資訊
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HPLC也可以用在大分子啦.... 你可以去看一些GPC的HPLC column.... 如果你的分子量差異夠分開的話.... 這是個不錯的選擇.... 另外要高純度的話還可以考慮用Affinity Chromatography.... 但你要先找出可以抓住你蛋白質的東西.... 而且要可以接在ge
#4
Re: [請益] 自己表現的protein用來treat細胞
推噓1(1推 0噓 0→)留言1則，0人參與, 最新作者gidon (打球的幸福呢)時間20年前 (2006/03/31 10:33), 編輯資訊
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His-tag 有阿. 可是有用過的人也知道HIS的純化程度對細胞而言是不夠的吧我有想過用FPLC(因為分子較大不適合HPLC)可是不太清楚利用FPLC純化出來的應該很純了. 但是像是外面公司賣的cytokine他們純度是比這更純還是已經夠了?感謝大家的解惑. 自己說一說怎麼覺得那我是不是應該打電話
#3
Re: [請益] 自己表現的protein用來treat細胞
推噓0(0推 0噓 0→)留言0則，0人參與, 最新作者allplanets (craft in universe)時間20年前 (2006/03/31 02:35), 編輯資訊
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雖然說SDS PAGE可以大致上判別蛋白質的純度. 可是濃度上的拿捏似乎就因人而異. 因此可能需要考慮到蛋白質本身的濃度和loading的總量. 剛剛進入這個領域. ㄧ切都還在摸索當中. 其實我也有上述的困擾. 還望各位大德能多加提點. --. ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc). ◆ Fr
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