Re: [請益] 自己表現的protein用來treat細胞
※ 引述《allplanets.bbs@ptt.cc (craft in universe)》之銘言：
> ※ 引述《microball (研究院路的紫薇花)》之銘言：
> : 厄...你做出的蛋白有tag嗎？
> : 如果有的話可以用此純化，不然可能要用LC之類的純化？
> : 品質的話...可以用OD去算純化後的濃度
> : 純度的話...可以跑SDS gel
> 雖然說SDS PAGE可以大致上判別蛋白質的純度
> 可是濃度上的拿捏似乎就因人而異
> 因此可能需要考慮到蛋白質本身的濃度和loading的總量
> 剛剛進入這個領域
> ㄧ切都還在摸索當中
> 其實我也有上述的困擾
> 還望各位大德能多加提點
跑完SDS之後可以利用image處理軟體 很像叫image J還是什麼的 (忘了 ==.==a)
這軟體可以分析每一個band的相對強度
如此應該可以做為一個分析純度的依據
另外 有paper的做法是在protein的前後各做一種tag (例如 N-His, C-Cys)
然後抓兩次 這樣是最好也是最方便的方式
前之前有一位前輩所提的先用His再用antibady抓是一樣的道理
不然也可以試一試跑兩次Ni離子親合性管柱看看吧 也是有人這樣做來提高效率
沒試過...
畢竟 有tag的蛋白質 在純化上的回收率是最高的 而且最快
另外 如果你可以提高蛋白質的表現量 那純度也會上昇的
一般酵素而言 95%以上就算很純了 可以試試看吧 再跟我們說結東好不好用^^
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原來 我已經忘了自己的語言
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※ Origin: 元智大學 風之塔 <bbs.yzu.edu.tw>
※ From : h113-210-66-33.seed.net.tw
※ X-Info: Re: [請益] 自己表現的protein用來treat細胞
※ X-Sign: 122RO2FDWV8oiYN4bsnc (06/04/01 10:07:11 )
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