Re: [問題] 請問有關western blotting的transfer問題
※ 引述《albertwang (會思考的魚)》之銘言：
: ※ 引述《ghjkl (黃寶臻黃寶臻黃寶臻)》之銘言：
: : 各位先進大家好
: : 小弟目前再進行western blotting的實驗
: : 由於希望能同時觀察100多Kd和30多Kd的蛋白
: : 所以在transfer時會把時間拉長
: : 但最近有各疑問就是
: : 我這樣的加長時間會不會造成較小的蛋白穿過PVDF而跑掉呢
: 30那一個機會滿大的
: 不過你用nc membrames
: 你的問題就不見啦
: : 在我看的一些protocol的網站中
: : 好像都沒有看到這一類的說明
: : 不知道有沒有人可以解說一下呢
蛋白質的SIZE是多大阿
這種基本的問題我都查不到
我做的是Bcl-2 Bax caspase 3,cytochrome c.
我是用semi-dry的方法只用300mA
相當於4~5V而己
TRANSFER後的GEL 染Coomasie blue 還是很藍很藍
但我用濕式 效率就很好 但雜bend很多 我用40microgram
transfer久一點或電流調高 蛋白會不會穿透呢
我的prestain marker 72kDa的會到濾紙上耶
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 61.62.195.21
推
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