Re: [問題] detecting membrane protein via weste …

看板Biotech (生命科學)作者hurp (LentiVirus)時間19年前 (2006/06/29 05:38)推噓1(1推 0噓 1→)

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※ 引述《KECCO (誰幫我保養車子~)》之銘言： : 我最近從cell extract membrane protein後~ : 利用western blotting去偵測.... : 因為我的membrane protein是一個glycoprotein~ : 另外 : 又因為是membrane protien~所以比較hydrophobic~~ : 我怎麼跑膠~怎麼transfer~ : ""band""都是糊的....band都很胖.... : 有人有什麼小撇步嗎?! : 加什麼特別的detergent會好點嗎?! : 懇請大家幫忙!! 我以前做的題目是transmembrane receptor protein(但不知有沒有被glyco就是了). 在做western blotting的過程中, 並沒有遇過像您這樣的問題. 通常收cell lysate時, 一些detergent如NP-40, tritonX-100, 都足夠把cell membrane 上的lipid 從 membrane protein 上頭分開, 而在denature ( 加sample buffer 去煮) 時, protein應該都 unfold, 不會有hydrophobic的問題. 至於glyco的東西, 我就不清楚了. 請問您收細胞的方法跟reagent為何? 用同樣的步驟方法跟reagent去看其他的蛋白質(不一定要membrane protein), 也會在Western blotting 上頭看到糊糊的Band嗎我有時會在Western Blotting有這樣糊糊的band, 通常是因為一時晃神, 把buffer 搞混了. 不過你說band很胖, 會不會是protein loading 得太多了? -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 130.219.235.253