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[問題] 請益PCR的問題

看板Biotech (生命科學)作者 (下之雪)時間19年前 (2006/08/15 13:54), 編輯推噓4(4推 0噓 0→)
留言4則, 4人參與, 最新討論串1/1
這個星期小弟跑了不下十次的PCR 跑的都是GAPDH有時會跑AHR 但是一直都是BAND伴隨著SMEAR 有時甚至沒有BAND只有SMEAR.. 於是乎在下卯起來TEST.... 分別試過了以下condition(每一次都是血和淚): 1.拿別人的cDNA來跑-也是時有時無但是必有SMEAR...殘念... 2.換一個taq-還是殘念... 3.換buffer-殘念... 4.調高Tm-....Orz... 5.配新primer-...快哭了...殘念.... 6.狂抽新RNA-O.D值爆好....但是依舊PCR...殘念.... 7.全程4度C保鮮-....殘廢了.. 8.降低cycle數....腦殘了... 9.換台機器-....直接ko...好慘... etc... 以下是還沒有試過的 1.RT-PCR的cDNA quality test-是這個錯誤嗎?可是他人的cDNA也是降子 2.用更高級的taq-目前是用geneaid的 3.treat香灰泡符水.....天阿....難道只有你能幫我了嗎? 4.去拜拜...告解...我沒有做過壞事阿...不.... 5.還有什麼遺漏的嗎? 各位大大...救救小弟我吧...把我從PCR煉獄解救吧... 阿里嘎多...THX...三碗豬腳...拜託拜託.... -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.112.58.13
推
08/15 20:41, , 1F
太濃？ 我現在PCR也撞牆中....Orz
08/15 20:41, 1F
推
08/16 01:12, , 2F
比較像是cDNA quality不好,再純化乾淨一點試試看?
08/16 01:12, 2F
推
08/16 11:18, , 3F
有使用過其他家的KIt 嗎?? 好像是cDNA
08/16 11:18, 3F
推
08/16 17:46, , 4F
那如果是cDNA的問題話，如何更加提高純度~~謝謝
08/16 17:46, 4F
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