Re: [問題] 請問一下restriction enzyme digestion …

看板Biotech (生命科學)作者philesazumi (苦悶阿)時間19年前 (2007/01/30 17:58)推噓1(1推 0噓 0→)

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※ 引述《blankmind (pain)》之銘言： : 上次換了一組kit後我的plasmid終於在gel看的到了 : 不過一用restriction enzyme切完後 : 跑出來的gel啥東西都沒有 : (隱約可看到沒切的plasmid) : 請問水的影響會很大嗎?? : (因為實驗室的pack很久沒換了...燈一直閃呀閃的...) : 還有我必須要用兩個enzyme去切 : 請問大家不同廠牌的enzyme他的buffer可以共用嗎? : 我的enzyme是 BamHI (New England Biolab) : XhoI (Promega) : 兩個都各有自己原廠附的buffer : 條件是1μl plasmid : 0.5μl enzyme(BamHI XhoI) : ddH2O 6.8μl : 10X BamHI buffer 1μl : 0.2μl BSA : 共10μl : 可以同時放下去切嗎? : 我切一個半小時會不會不夠久... : 麻煩大家幫我解答一下 : 謝謝大家!!!! 可以去查一下catalog...看bfr.的組成我試過EcoRI(NEB)/XhoI(promega)沒有什麼差... 或許EcoRI本身就很強了...所以沒影響... 水可能有影響（DNase）...到別的地方裝一些水回來阿...很好解決的問題你也可以跟其他實驗室借enzyme.來作control 然後DNA下多一點去切阿...用1ug的量...不信會看不到..... 如果沒那麼多....就多抽幾管mini...或是抽個midi...maxi的你上列的條件跟我差不多...我只是100x BSA 用0.5ul（因為懶得稀釋）.. 又怕取不到....所以才加0.5.....只要夠量...那沒有什麼差別.... 至於會切就是會切.....一個半小時夠了....頂多是切不完全不放心...就放個三小時...總比你跑完膠...看不到...再重作一次還省時..... 建議你...要試...就一次試.....這樣省很多時間 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 163.15.174.141