[問題] colony PCR有band 但定序結果錯誤

看板Biotech (生命科學)作者 (要變成自己喜歡的模樣)時間18年前 (2007/02/27 09:12), 編輯推噓3(305)
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我的 insert DNA 有 846bp(PCR 得到的) 放到 yT&A 的 TA cloning vector 中(用 TA clone 接) 藍白篩選了六個 colony 做 PCR 結果都有還算 specific 的片段 挑了四個 colony 送定序後 結果四個都沒有 insert DNA 的序列 甚至連 當初做 colony PCR 的 primer 序列都沒有 請問可能發生什麼情況?我是要重做一次嗎? -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.112.79.56

02/27 12:26, , 1F
定序的primer用誰的?
02/27 12:26, 1F

02/27 12:27, , 2F
另外, 最好是送plamid去定序
02/27 12:27, 2F

02/27 15:08, , 3F
如果用vector的primer可能是正反接的問題把序列反轉試試看囉
02/27 15:08, 3F

03/01 14:17, , 4F
定序的primer是vector上的M13,另外 我已經找過反轉互補
03/01 14:17, 4F

03/01 14:17, , 5F
共四種可能性 但都沒有找到
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03/05 19:53, , 6F
可能是你P到的東西本來就不是你想要的specific product
03/05 19:53, 6F

03/05 19:53, , 7F
我們家有遇過這種情況
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03/05 19:54, , 8F
不如乾脆先直接把PCR product純化後送定序
03/05 19:54, 8F
文章代碼(AID): #15uuMRoh (Biotech)
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