[問題]有關real-time PCR 的結果?

看板Biotech (生命科學)作者 (..N )時間18年前 (2007/03/01 23:08), 編輯推噓4(402)
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最近在作 real-time PCR 的實驗 在RT-PCR時,有先跑膠,確定確實有產物(且只有一條band) 但在跑real-time PCR時, 卻發現melting curve 有兩個peak .. 我是用lightcycler 機器, 一開始以為是annealing Tm 不夠高.. 但後來調至52度,仍有此現象.... 且跑膠結果發現兩個peak的產物大小為(200bp and 400bp). 想請教板上各位大大... 這是什麼原因呢?? 是primer設計不好嗎?..還是?? 最近實驗數據沒一個能交差的..請大家救救我吧...先謝過 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 163.25.118.146

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如果有兩個產物 melting curve也不同 可以考慮非特異性
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什麼的非特異性?不懂耶...
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簡單的說 primer夾到non-target sequence
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52度 蠻低的,我都用60度
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請換primer~~有primer dimer的情形!
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注意一下NTC的Tm值~跟產物是否相當?有的話可能dna conta!
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文章代碼(AID): #15vko6yD (Biotech)
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