[問題] vector 為pQE30的colon
我將pQE30的His tag接在我insert表現淡白的N端
定序過後有看到his tag的序列
induction後也有表現
不過做純化後卻發現sample才一倒入 我要的protein絕大部分就被elute出來了
另外有一些protein則是在加入binding bf 以及wash bf時被elute出
反正在我加入elution bf後沒有東西出來
我在想會不會是
1.我的蛋白大概38KD左右他的結構把his tag遮住了(adhesin protein)
2.binding bf中的imidazoid濃度太高(實驗室其他人用過說她們用OK的濃度)
會有其他原因嗎?
我可以如何做來使protein和resin的作用能力變好ㄚˊˋ(精華區說可以試試看imidazoid
= 0 mM @@? 或是10mM)
我個人認為我要的蛋白還是和resin有作用能力的
因為在用wash bf沖洗時還有產物會出現... ...
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