[問題]關於要做長片段的PCR
大家好~
最近我在做長片段的PCR(4.38 kb)
已經試做過幾次了 不過 都沒有P到任何片段(連雜band都沒有)
想請問版上的大家 有沒有比較推薦 可以用在增幅5kb(或以上)的DNA polymerase
我現在是用Taq XL
我的PCR condition如下
cDNA 3 ul
10X buffer 5 ul
primer-f 1.5 ul
primer-r 1.5 ul
10mM dNTP 3 ul
Taq XL 0.5 ul
DDW 35.5 ul
--------------------------------
total 50 ul
PCR cycle condition
94度 5 min
94度 30s --> denature
58度 30s --> annealing
68度 5 min --> extension
72度 10 min
35 cycle
請問做這種長片段PCR時 酵素是否夠力撐完全程 需不需要在半途補充酵素
希望各位高手能給我一些意見 先謝謝大家了~
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◆ From: 140.120.208.19
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