[問題] 請問自製Gradient SDS PAGE的可行性與方法?

看板Biotech (生命科學)作者 (LittleBU)時間18年前 (2007/09/03 12:37), 編輯推噓10(1006)
留言16則, 5人參與, 最新討論串1/1
各位先進 看paper的時候會看到別人使用NuPAGE的4-12% PAGE 想請問如果我也有類似的需求 那該如何自製類似的gel? 假如我想要的梯度是15%-8% 那我應該等15%的Gel凝了之後再加8%下去凝? 還是15%和8%各加完APS、TEMED後混在一起下去凝? 另外還有一個問題 如果loading兩種protein marker 結果marker1和marker2同樣分子量的band 出現在不同高度上 這樣是要相信誰 囧... 先謝謝各位的指教了 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 163.15.175.107

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謝謝您,可是沒有$$,才會想要問有沒有別的方法
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一定要用蠕動pump吧....手工能作gradient 算是達人了
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那請問可以做兩種%的嗎? 謝謝
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你要不要先說你的目的..也沒有不行做兩種% 只是很少見
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再次謝謝您的回應 我要的目標在21kda和160kda
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但是用11%的gel 130和170的marker相隔很近
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所以想請問是否能用不同濃度來分比較開一點 Orz
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作過 用針筒加針頭穩定流進去 有效果
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而且做法是 在微量離心管上配好各種梯度濃度 先放流濃液
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配法是做比例式地混合兩濃度的膠液
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針筒可行+1
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請問您 例如8~15% 是將兩種濃度都配好 APS也加完
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之後再將兩種濃度以不同比例配在微量離心管?
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然後用針筒將每一小管依次緩慢注入玻璃內嗎?
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還有這樣的話每一個比例大約要加多少量呢?謝謝
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文章代碼(AID): #16su-02o (Biotech)
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