[問題] Huh7 cell line 收細胞 細胞易破

看板Biotech (生命科學)作者 (不以物喜不以己悲)時間18年前 (2007/09/16 01:53), 編輯推噓2(200)
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用CaCl2 對Huh7 做transfection 用12 well plate, 細胞數 1x10*5 /well 從第一天seeding後到第四天收細胞 收細胞用的是trypsin,遇到的問題是--> passage不下來,(懷疑是到第四天細胞太滿了) 因此trypsin作用的時間就讓他久一點 但是放的時間太久細胞又會破掉(最多放到7分鐘 37度c還不下來), 細胞破了,實驗就白費了 請問大家有這問題嗎? 怎麻解決呢? 之前用293A 不會有這問題 謝謝大家 -- im a good student -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 59.115.83.27

09/16 22:17, , 1F
先用含有5mM EDTA的PBS wash 2-3次 每次靜置2分鐘
09/16 22:17, 1F

09/17 09:39, , 2F
用PBS wash過後 直接加lysis buffer到well
09/17 09:39, 2F
文章代碼(AID): #16x1mniK (Biotech)
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