[求救] real time PCR 跑不出來

看板Biotech (生命科學)作者 (你今天yanzi了嗎)時間18年前 (2008/04/07 14:23), 編輯推噓3(307)
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板上各位大大好 我最近在跑real time pcr,但是一直卡在primer的問題 我是用DNA star跟NTI兩個軟體交叉確認primer的優劣度 但是再跑real time時,同一個sample不是跑不出來,就是Ct值差很多(我做三重複) 而在Tm設定方面,我按照軟體建議的Tm值以及合primer公司給的建議值,各做一次 但是一直有前述的問題...而control組的都有跑出來 搞得目前我不知道該從哪邊去著手了@@ 有哪位大大可以給我一點建議嗎? 謝謝 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.113.21.135

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sample 品質有在水準上嗎???
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04/07 22:54, , 2F
沒有非常好...但是OK,只是濃度沒有很高,但是其他PRIMER都
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04/07 22:55, , 3F
有跑出來...我有懷疑過會不會是濃度太低
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04/07 23:15, , 4F
你先用一般machine 有run出來嗎??
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04/07 23:15, , 5F
沒有非常好是怎樣?? 你是RNA or DNA??
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04/07 23:16, , 6F
您得機型是??
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04/09 22:45, , 7F
最近我也遇到類似情況 後來是用Biorad機器進行gradient
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annealing temp去找尋可以作用的溫度 發現適用溫度比預期少了
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04/09 22:47, , 9F
8度 或許你可以參考看看
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04/10 10:07, , 10F
嗯嗯 謝謝^^
04/10 10:07, 10F
文章代碼(AID): #17-RtwyP (Biotech)
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