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[求救]protein protein interaction

看板Biotech (生命科學)作者 (sweetE)時間18年前 (2008/04/12 19:20), 編輯推噓8(8推 0噓 3→)
留言11則, 9人參與, 最新討論串1/1
請問各位大大 有哪些方式可以證明A蛋白與B蛋白的association 是屬於"DIRECT" interaction? 目前我所知道的方法有點類似FRET overexpression接上不同螢光蛋白的A B蛋白(A的激發光被B吸收) 當他們是direct association時 由於距離很近 所以可以引發FRET效應 發出的螢光 major會是B蛋白的螢光(A蛋白發出的螢光非常微弱) 我想除了這個以外 是否還有其他的方法可以證明 謝謝大家回答~^^ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 59.115.102.190
推
04/12 20:44, , 1F
pull-down
04/12 20:44, 1F
推
04/12 20:46, , 2F
Yeast two hybrid..or IP(有可能會co-precipitative)..
04/12 20:46, 2F
→
04/12 21:01, , 3F
IP的話似乎無法證明是"DIRECT"~ 可能中間還有別的蛋白介入
04/12 21:01, 3F
推
04/12 21:11, , 4F
分別純化recombinant protein=>IP
04/12 21:11, 4F
推
04/13 00:29, , 5F
in vitro pull down配合找出interaction domain
04/13 00:29, 5F
→
04/13 00:29, , 6F
Y2H是非常好的direct evidence
04/13 00:29, 6F
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04/13 15:07, , 7F
GST pull down +TNT
04/13 15:07, 7F
推
04/13 17:22, , 8F
AUC跑沉降係數應該可以看出來,不過全台灣好像沒幾台的樣子!
04/13 17:22, 8F
推
04/13 18:36, , 9F
即便有AUC 全台灣也沒幾人會用AUC做interaction的實驗
04/13 18:36, 9F
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04/13 18:38, , 10F
但 SPR 這儀器也是很難搞 能不用測ka kd 就不要測
04/13 18:38, 10F
推
04/14 02:20, , 11F
IP得做到2種Ab互抓都可以抓到對方(A IP B+B IP A)才算是
04/14 02:20, 11F
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